畜牧兽医学报

作者：杨阳, 张雪莲, 张万锋, 李文霞, 李文新, 蔡春波, 路畅, 高鹏飞, 郭晓红, 李步高, 曹果清

单位：山西农业大学动物科学学院, 太谷 030801

关键词：猪,C1QTNF3基因,成脂分化,miR-101,可变剪接

基金：三晋学者支持计划专项经费资助（2016；2017）；国家自然科学基金（31872336）；山西省“1331”工程（J201811301）；山西省青年基金（201901D211369）；山西省优秀博士奖励（SXYBKY2019030）；山西农业大学科技创新（2020BQ01）

旨在研究猪C1QTNF3基因可变剪接体的特性及miR-101通过C1QTNF3基因促进猪脂肪SV细胞成脂分化的机制。本研究采集3头30日龄健康马身猪仔公猪心、肝、脾、肺、肾、胃、股二头肌、腰大肌、皮下脂肪和背部脂肪组织样品，首先利用RT-PCR技术和生物信息学方法对C1QTNF3基因的不同转录本进行扩增和生物学特性分析，采用qRT-PCR技术检测C1QTNF3基因不同转录本在猪组织中的表达变化。随后，利用生物信息学预测发现，C1QTNF3上游的调控因子是miR-101，采用双荧光素酶报告试验验证miR-101对C1QTNF3的调控作用。最后，利用油红O染色和qRT-PCR技术检测过表达miR-101对猪脂肪SV细胞成脂分化的影响。基因克隆得到猪C1QTNF3存在两个转录本C1QTNF3和C1QTNF3-1，其中C1QTNF3-1为新鉴定的转录本；测序分析显示，与C1QTNF3相比，C1QTNF3-1的第1外显子区域缺失了219个碱基，少编码73个氨基酸。进化树分析显示，猪C1QTNF3和C1QTNF3-1蛋白序列与人和马来亚穿山甲等物种的亲缘关系较近。C1QTNF3和C1QTNF3-1在猪各组织中均有表达，且在各组织中C1QTNF3-1的表达量均极显著高于C1QTNF3（P<0.01）。过表达miR-101极显著下调C1QTNF3 3'UTR区域的荧光素酶活性（P<0.01）和C1QTNF3 mRNA的表达（P<0.01），同时增加了脂肪细胞成脂分化关键基因PPARγ、C/EBPβ、SREBP-1c和FABP4的mRNA表达量（P<0.01）。本试验成功克隆了猪C1QTNF3基因的两个可变剪接体，其中C1QTNF3-1在猪不同组织中均高表达，推测该转录本为基因发挥功能的主要亚型。并深入研究了C1QTNF3基因的上游调控因子，揭示了miR-101靶向C1QTNF3促进成脂分化的机制，丰富了C1QTNF3的生物学作用和调控网络。

来源：2021年第11期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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