畜牧兽医学报

作者：林梦舟, 吴双, 徐建生, 谢军, 吴植, 姜勇, 朱善元

单位：1. 扬州大学兽医学院, 扬州 225009;2. 江苏农牧科技职业学院 江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室, 泰州 225300;3. 江苏立华牧业股份有限公司, 常州 213000

关键词：1型鸭肝炎病毒,3型鸭肝炎病毒,鸭病毒性肝炎,实时荧光定量PCR

基金：江苏高校“青蓝工程”项目[苏教师函（2020）10号]；“六大人才高峰”项目（NY-009）；江苏省农业科技自主创新资金项目[CX （18）1004]；江苏省高校优秀科技创新团队项目[苏教科函（2019）7号]

旨在建立一种针对鸭甲肝病毒1型（DHAV-1）和鸭甲肝病毒3型（DHAV-3）的高效快速、高灵敏度和高特异性的双重TaqMan实时荧光定量PCR （q-PCR）检测方法并应用于临床疑似样品检测。根据DHAV-1和DHAV-3的VP1基因保守区域，分别设计合成了2对特异性引物和探针，在此基础上建立并优化了双重TaqMan实时荧光定量PCR方法。结果显示：优化后标准曲线的相关系数（R2）均在0.999以上，扩增效率（E）在105%~110%，其组内变异系数（i-CV）与组间变异系数（c-CV）均在0.77%以下。运用双重q-PCR方法对不同稀释度的混合质粒与病毒核酸进行检测，结果表明，建立的双重TaqMan q-PCR特异性高；同时检测DHAV-1和DHAV-3的灵敏度均可达10个拷贝，分别是常规PCR方法的1 000倍和100倍。对40份来自苏中、苏北地区的疑似鸭肝炎病毒感染的鸭组织病料进行检测，结果表明，q-PCR方法检出36份阳性病料，阳性率为90%；而常规PCR方法未能检出高Ct值的样品，阳性率为72.5%（29份阳性病料）。建立的双重TaqManq-PCR检测方法为DHAV-1与DHAV-3的临床样品检测提供了高效、灵敏、特异的工具，推动了临床分子流行病学调查及病毒定量分析等研究。

来源：2021年第11期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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