畜牧兽医学报

作者：李美娣, 赵锃珏, 刘汉清, 傅嘉莉, 张玲华, 武力

单位：1. 广东华农高科生物药业有限公司, 广州 510642;2. 华南农业大学生命科学学院 广东省农业生物蛋白质功能与调控重点实验室, 广州 510642;3. 华南农业大学兽医学院, 广州 510642

关键词：poCRIP2,长白猪,IPEC-J2,感染

基金：广东省自然基金项目（2018A030313625）

本研究利用广泛用于肠道感染机制研究的IPEC-J2细胞系探究poCRIP2在猪胃肠道炎症中的作用。在识别poCRIP2基因全长序列的基础上研究poCRIP2的有关特征，同时对其组织表达模式进行分析，并建立有效的poCRIP2三维结构模型以解释其功能，了解poCRIP2在细菌感染过程中的免疫作用及其与NF-κB通路的关系。采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术从猪心获得poCRIP2的全长序列；利用Primer Premier5.0和NCBI Primer BLAST程序设计了特异性引物对，采用保家基因β-肌动蛋白（β-actin）对结果进行归一化处理，测试CRIP2基因在猪体内的组织分布；采用生物信息学方法对poCRIP2的特性进行分析，构建poCRIP2蛋白模型；利用ROBETTA服务器，以高度同源的小鼠LIM-homeodomain protein islet 1（Isl1）（PDB：4 JCJ）为模板，模拟poCRIP2的三维结构；用PROCHECK和ProSA对模型进行了分析；应用Procheck对蛋白质折叠进行立体化学和拓扑分析，并应用ProSA对蛋白质折叠进行评价；使用PyMOL程序对建模结果进行评估，分析poCRIP2的保守结构域；设计肠道感染试验，分析poCRIP2在肠道免疫中的功能。结果表明，从猪心获得的poCRIP2 cDNA全长序列为1 118 bp，poCRIP2蛋白与人和小鼠的同源性分别为94.23%和93.75%，它还含有两个保守区（LIM-TLP和LIM-CRP）。poCRIP2的组织表达模式分析表明，poCRIP2在所有组织中均有表达，其中在小肠、肺、胃、脾和肌肉等中表达较低。poCRIP2在革兰阴性菌作用下的表达水平比对照组高1~2倍，但NF-κB通路在同一作用下被激活，无抑制作用，poCRIP2可能不与NF-κB通路相互作用，而与其它通路共同作用于肠道免疫。本研究成功获得了猪CRIP2基因的全长序列，poCRIP2的组织表达模式表明，poCRIP2与人CRIP2相似，建立了可靠的三维结构模型，基于该模型推测poCRIP2中包含的功能主要由β折叠和α-螺旋结构实现，革兰阴性菌感染肠道后poCRIP2能被显著上调，poCRIP2应不依赖于NF-κB通路，在肠道免疫中起其他作用。

来源：2021年第11期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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