畜牧兽医学报

作者：汤亚茹, 阳美霞, 贾金美, 张虹亮, 王水莲

单位：湖南农业大学动物医学院, 长沙 410128

关键词：GnIH,载体构建,间质细胞,细胞凋亡,睾酮,睾酮合成酶

基金：湖南省教育厅重点项目（18A095）

本试验通过构建GnIH过表达载体，探究其对小鼠睾丸间质细胞（TM3细胞系）的凋亡效应及睾酮合成的调节作用。从6~8周雄性小鼠睾丸组织中提取RNA，反转录获得cDNA样本，利用PCR扩增并纯化GnIH基因，应用T4连接酶将其连入PLVX-IRES-ZsGreen1载体，进一步转化到感受态菌中，通过PCR、双酶切及测序鉴定后提取质粒。随后将构建好的重组质粒转染TM3细胞系72 h，分为空质粒组和GnIH过表达组，通过显微镜观察细胞荧光、实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法、ELISA法和流式细胞术检测GnIH表达水平、细胞凋亡率及相关凋亡基因表达变化、睾酮分泌水平和睾酮合成酶基因表达水平。结果显示，GnIH扩增片段序列与参考序列一致，将GnIH过表达质粒转染至TM3细胞系72 h后，可见高强度绿色荧光，过表达组中GnIH基因水平极显著升高（P0.05）。综上所述，在体外培养的TM3细胞中过表达GnIH能诱导TM3细胞凋亡、抑制睾酮分泌且降低睾酮合成相关酶的基因表达水平，推断GnIH在小鼠睾丸间质细胞生长和睾酮合成过程中发挥负调控作用。本研究可为揭示GnIH在雄性哺乳动物生殖调控过程中的作用提供科学理论依据。

来源：2021年第10期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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