畜牧兽医学报

作者：姚旭东, 蒙亚琦, 任秀美奥, 郭延华, 唐红, 张译元, 王立民, 周平

单位：1. 石河子大学动物科技学院, 石河子 832000;2. 新疆农垦科学院 省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室, 石河子 832000

关键词：哈萨克羊,单碱基编辑,MSTN

基金：转基因生物新品种培育重大专项（2016ZX08008001）；兵团“强青”科技创新骨干人才计划项目（2021CB032）；国家自然科学基金（31660341）；省部共建绵羊遗传改良与健康养殖重点实验室（2013KLS05）

肌肉生长抑制素（myostatin，MSTN）可负调控骨骼肌的发育。本研究利用胞嘧啶碱基编辑器（cytidine base editor，CBE）在哈萨克羊MSTN基因编码区提前引入终止密码子，以期达到敲除MSTN基因的目的。共设计2条靶向哈萨克羊MSTN基因不同外显子的sgRNAs，分别连接至pGL3-U6-sgRNA-PGK-puromycin质粒，并与pCMV-AncBE4 max-P2A-GFP质粒共转染哈萨克羊胎儿成纤维细胞，经CruiserTM酶酶切检测、Sanger测序和TA克隆分析。结果显示，成功筛选出可以在哈萨克羊MSTN基因外显子提前引入终止密码子的2条sgRNAs，其中STOPsg-1靶位点编辑效率为26.7%，STOPsg-2靶位点的编辑效率为6.7%。本研究成功运用CBE（AncBE4 max）技术在哈萨克羊胎儿成纤维细胞MSTN基因编码区实现定点编辑，为培育精确编辑MSTN基因的哈萨克羊奠定基础。

来源：2021年第8期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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