畜牧兽医学报

作者：郑红青, 吴旭锦, 朱小甫, 尹宝英, 高军花, 李艳芝, 植婵萍

单位：1. 咸阳职业技术学院畜牧兽医研究所, 咸阳市动物疫病分子生物学诊断技术研究重点实验室, 咸阳 712000;2. 邢台市农业农村局, 邢台 054001;3. 衡水职业技术学院, 衡水 053000;4. 广东茂名农林科技职业学院, 茂名 525000

关键词：猪流行性腹泻病毒,微小RNA133c-3p,BCL2样蛋白,凋亡

基金：咸阳职业技术学院科研基金重大项目（2020KJA01）；咸阳市科技计划项目（2019k02-64）；陕西省教育厅专项科学研究计划项目（18JK1208）；陕西科技计划一般青年项目（2021JQ-900）；咸阳职业技术学院博士启动基金（2021BK04）；陕西省科技计划项目（2021NY-037）

旨在探讨miR-133c-3p在猪流行腹泻病毒（PEDV）引起的细胞凋亡过程中所起的作用，并探讨其发挥作用的机制。以PEDV感染MARC-145细胞为模型，检测PEDV感染过程中细胞的凋亡情况以及6个与凋亡相关microRNAs的表达差异，RT-qPCR检测PEDV感染过程中与凋亡相关microRNAs的表达差异，合成miR-133c-3p的模拟物和抑制剂，转染MARC-145细胞，采用流式细胞术检测PEDV感染MARC-145细胞的凋亡情况，流式细胞术检测过表达和敲低miR-133c-3p后细胞的凋亡情况，采用生物信息学方法预测miR-133c-3p的靶基因，荧光素酶报告基因检测了miR-133c-3p和靶基因的结合情况，Western blot检测了过表达miR-133c-3p对BCL-w和PEDV蛋白表达水平的调控，用siRNA敲低BCL-w蛋白检测细胞凋亡情况。结果显示，PEDV的感染可以诱导MARC-145细胞凋亡（P<0.05），与凋亡相关的microRNAs，如miR-133c-3p和miR-149-5p的表达上调（P<0.05；P<0.001），miR-138-3p的表达下调（P<0.05）。其中，miR-133c-3p在病毒感染后升高了约5倍（P<0.01）。过表达miR-133c-3p后，细胞凋亡率显著升高（P<0.01）；敲低miR-133c-3p后，细胞凋亡率降低（P<0.05）。用生物信息学方法预测miR-133c-3p与BCL2L2的3'UTR区域有结合位点，荧光素酶报告基因试验显示miR-133c-3p可以和BCL2L2基因靶向结合（P<0.01），过表达miR-133c-3p后细胞内BCL-w蛋白的表达明显下调，且病毒的感染可以降低BCL-w的表达水平，敲低BCL-w后细胞凋亡率显著升高（P<0.01）。PEDV感染后可以通过上调miR-133c-3p的表达来下调BCL2L2的表达，从而促进细胞的凋亡。

来源：2021年第8期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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