畜牧兽医学报

作者：侯景, 申超超, 张大俊, 杨博, 史喜绢, 张婷, 崔卉梅, 袁兴国, 赵登率, 陈学辉, 张克山, 郑海学, 刘湘涛

单位：中国农业科学院兰州兽医研究所 家畜疫病病原生物学国家重点实验室 农业农村部畜禽病毒学重点开放实验室 国家口蹄疫参考实验室, 兰州 730046

关键词：非洲猪瘟病毒,解旋酶,D1133L基因,序列分析,结构预测,亚细胞定位

基金：甘肃省科技重大专项-农业领域（20ZD7NA006）；国家自然科学基金联合项目（31941002）；国家重点研发计划（2018YFC0840400）

旨在通过预测分析和亚细胞定位研究非洲猪瘟病毒（ASFV） D1133L基因结构、亚细胞定位与功能间的关系。作者使用Mega6.0软件绘制了7株不同基因型的D1133L解旋酶和ASFV编码的其他5个解旋酶基因的系统进化树，使用EXPASY、PRABI和SWISS-MODEL软件预测了该基因所编码蛋白序列的二、三级结构；根据GenBank公布的ASFV序列（LR743116.1），合成D1133L基因并构建其重组真核表达质粒pCMV-D1133L，蛋白免疫印迹（Western blot，WB）验证该基因表达后，将重组质粒转染至PK-15细胞，应用间接免疫荧光试验（indirect immunofluorescence assay，IFA）研究了该蛋白的亚细胞定位。结果表明，通过ASFV解旋酶的基因系统进化树，发现5种解旋酶基因均相对保守。D1133L基因全长3 402 bp，表达的蛋白为124.63 ku，G+C含量为6.1%，A+T含量为10.6%；二级结构分析表明α螺旋占48.90%，扩展链占13.50％，无规卷曲为33.27%；三级结构分析表明六自由度结构（six degree of freedom，QMQE）为0.20，覆盖率84%，且预测以α螺旋为主的高级结构；通过LOCSVMPSI分析预测，显示D1133L蛋白定位于细胞核内与细胞质内的概率是相同的。WB结果显示pCMV-D1133L质粒正常表达，IFA试验证明ASFV编码的解旋酶D1133L同时分布于细胞核和细胞质。本研究通过对D1133L基因序列、结构功能预测，并通过IFA验证了D1133L亚细胞分布，为进一步揭示D1133L基因功能奠定了一定基础。

来源：2021年第7期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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