畜牧兽医学报

作者：郭瑞珍, 苏冰倩, 王棋, 王一, 于朋伟, 孟洁洁, 齐艳丽, 杨国宇, 褚贝贝

单位：河南农业大学 农业部动物生化与营养重点开放实验室, 郑州 450002

关键词：禽腺病毒血清4型,Fiber2蛋白,单克隆抗体,双抗夹心ELISA,表位鉴定

基金：转基因生物新品种培育重大专项（2016ZX08006001-006）

旨在制备禽腺病毒血清4型（FAdV-4）纤突蛋白（Fiber2）的特异性单克隆抗体（MAb），本研究将原核表达的可溶性重组蛋白NusA-Fiber2作为免疫原免疫BALB/c雌鼠，筛选获得3株能稳定分泌抗FAdV-4 Fiber2蛋白MAb的杂交瘤细胞株2G5、2G8、4C2，取细胞株2G5制备腹水并纯化，利用间接免疫荧光试验（immunofluorescence assay，IFA）和Western blot鉴定该单抗的特异性。用制备的单抗包被酶标板，通过一系列的优化，建立了FAdV-4 Fiber2双抗夹心ELISA检测方法。通过逐步截短分析鉴定出单克隆抗体识别的抗原表位区域。结果表明：成功获取3株单克隆细胞株2G5、2G8、4C2。MAb 2G5可与原核表达纯化的Fiber2蛋白及FAdV-4特异性反应。建立的双抗夹心ELISA检测方法具有很好的特异性、灵敏性和重复性。该MAb识别的表位序列是N端aa1—33。本研究成功制备了具有良好Western blot和IFA反应原性的单克隆抗体，为Fiber2蛋白功能研究和FAdV-4新型表位疫苗商品化研发奠定了基础。

来源：2021年第7期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

查看畜牧兽医学报杂志2021年第7期