畜牧兽医学报

作者：于秀菊, 孙铮, 韩小涛, 李钰钰, 于淼, 董常生

单位：1. 山西农业大学动物医学学院, 太谷 030801;2. 辽宁省疾病预防控制中心, 沈阳 110005

关键词：羊驼,枯草芽胞杆菌,细菌素,分离纯化,原核表达

基金：山西省青年科学基金项目（201801D221301）；山西农业大学创新团队项目（CXTD201201）

目前，我国全面禁止饲料中添加抗生素，寻找新型的抗生素替代物是当前研究的热点之一。本研究旨在分离枯草芽胞杆菌SXAU18所产具有抗菌活性的蛋白物质，并通过原核表达系统获得其具有抗菌活性的重组蛋白。试验选用硫酸铵沉淀、氯仿抽提、分子截留等蛋白提取技术，对枯草芽胞杆菌SXAU18产生的抗菌蛋白进行分离纯化；通过SDS-PAGE技术和牛津杯扩散法检测分离到的蛋白物质的抑菌活性；通过质谱、生物信息学技术分析预测目的蛋白的基因序列；利用大肠杆菌表达系统和AKTA蛋白纯化系统对目的蛋白进行表达和纯化；借助牛津杯扩散法鉴定重组蛋白的抑菌活性。结果表明，枯草芽胞杆菌SXAU18所产的抗菌物质为相对分子质量15 ku左右的蛋白质，含有共同的特定氨基酸序列—GSSIFGLAPGK，对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、藤黄微球菌和单增李斯特菌有较好的抑菌活性；通过质谱分析和生物信息学推测SXAU18所产的（主要）抑菌蛋白为DarA；经诱导表达的重组蛋白DarA主要以可溶性上清蛋白形式存在，纯化后的DarA蛋白为单一条带，并具有良好的抑菌活性。结果提示，分离自枯草芽胞杆菌SXAU18的抗菌蛋白DarA具有抑制金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、藤黄微球菌和单增李斯特菌生长的活性，且可以通过体外表达获取该蛋白。

来源：2021年第5期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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