畜牧兽医学报

作者：戴巍, 宋瑞龙, 张远浩, 邹辉, 顾建红, 袁燕, 卞建春, 刘学忠

单位：1. 扬州大学兽医学院, 扬州 225009;2. 江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心, 扬州 225009;3. 扬州大学 教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室, 扬州 225009

关键词：骨骼肌卫星细胞,分离,培养,诱导分化,鉴定

基金：江苏省农业科技自主创新资金项目（CX（18）3022）；江苏省高校优势学科建设工程资助项目（PAPD）

旨在建立鸡骨骼肌卫星细胞（muscle satellite cell，MSC）体外分离、培养、纯化、诱导分化及鉴定的方法。选取12胚龄SPF鸡胚，综合松散肌肉纤维和游离纤维基质层细胞等原理，对分离细胞使用的酶以及后续的细胞纯化、诱导分化方法进行优化；并从形态学、细胞分化能力、生长曲线、免疫荧光、RT-PCR等方面对MSC进行鉴定，从而提出一种鸡骨骼肌卫星细胞的混合酶消化分离培养方法。结果表明，刚分离纯化后的细胞折光性强，24 h贴壁展开后呈纺锤状；待诱导分化后能形成排列整齐的多核肌管；CCK-8测定细胞生长曲线呈典型的“S”型；优化后，细胞存活率为（90.82±1.294）%，细胞纯度为（90.44±1.264）%；免疫荧光检测标志性基因Pax7、Desmin表达阳性；RT-PCR检测标志性基因Pax7、MyHC、MyoD1呈阳性；并且分化前标志性基因Pax7表达量是分化后的1.705倍，分化后期标志性基因MyHC表达量是分化前的13.073倍。该试验建立了一种快速简便的鸡骨骼肌卫星细胞的体外培养方法，为研究鸡骨骼肌细胞生物学机制、肉鸡品种优化、细胞移植修复提供良好的细胞模型。

来源：2021年第3期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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