畜牧兽医学报

作者：许冬梅, 朱芷葳, 唐中伟, 李鹏飞, 董常生, 赵宇军

单位：1. 山西农业大学生命科学学院, 太谷 030801;2. 山西农业大学动物医学学院, 太谷 030801

关键词：miR-186-5p,绵羊黑素细胞,α-MSH,TYR基因家族,黑色素合成

基金：国家自然科学基金（31873002）；山西省重点研发计划项目（201803D31062）；山西农业大学科技创新基金（2017zz10）

黑色素合成受多种基因和miRNAs的调控，为了研究miR-186-5p与α-MSH协同作用对绵羊黑素细胞黑色素生成的影响。本研究在绵羊黑素细胞中转染miR-186-5p表达载体，同时添加α-MSH，通过实时荧光PCR（quantitative real time polymerase chain reaction，qRT-PCR）和蛋白质免疫印迹（Western blotting）检测MITF、TYR、TYRP1和TYRP2 4种可能与之相关的基因表达情况；利用免疫组化检测MITF蛋白在黑素细胞中的表达和亚细胞定位；通过分光光度法测定黑色素含量变化；利用划痕试验测定细胞迁移情况，试验分为miR-186-5p转染组、miR-186-5p+α-MSH互作组和对照组，每组3个重复。结果显示，miR-186-5p能够抑制绵羊黑素细胞中MITF、TYR、TYRP1和TYRP2的表达，并最终抑制黑色素的生成。而添加α-MSH能缓解miR-186-5p对MITF、TYR、TYRP1和TYRP2表达的抑制作用，进而在一定程度上恢复黑色素的含量。另外，miR-186-5p还能抑制细胞分裂，并阻碍细胞的迁移，而α-MSH无法抵消miR-186-5p产生的这种负面影响。上述结果表明，在绵羊黑素细胞中，miR-186-5p和α-MSH均参与调控黑色素合成途径，其中，miR-186-5p主要起负调控作用，而α-MSH主要参与相关位点的正调控，并能部分恢复miR-186-5p导致的黑色素含量下降。值得注意的是，miR-186-5p还参与调控细胞的增殖和迁移，而α-MSH不参与相关调控。

来源：2021年第1期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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