畜牧兽医学报

作者：钱榜, 李彦敏, 朱学亮, 张学燕, Niyokwishimira Alfred, 窦永喜, 张志东

单位：1. 中国农业科学院兰州兽医研究所, 家畜疫病病原生物学国家重点实验室, 兰州 730046;2. 西南民族大学畜牧兽医学院, 成都 610041

关键词：小反刍兽疫病毒,H蛋白,B细胞表位,iELISA

基金：国家重点研发计划项目（2016YFD0500108；2016YFD0500901）；国家绒毛用羊产业技术体系建设专项资金（CARS-39-13）；中央级公益性科研院所基本科研业务费专项（Y2020GH19）

本研究旨在建立针对小反刍兽疫病毒（peste des petits ruminants virus，PPRV）H蛋白抗体的iELISA检测方法。以筛选的H蛋白B细胞表位为基础，选择反应原性较好的4个抗原表位肽串联后合成作为包被抗原，优化各步反应条件及筛选各种缓冲液，并确定检测临界值。经优化后，多表位抗原肽的最佳包被量为1.5×10-6 μg·孔-1，血清临界稀释度为1：100，酶标二抗最佳稀释度为1：80 000；包被液为碳酸氢盐缓冲液，血清和二抗稀释液均为PBST溶液，封闭液为2% BSA溶液；阴、阳性临界值为0.25。不同血清的检测结果表明，批内及批间检测结果变异系数均小于10%，证明该方法具有良好的稳定性；对羊痘、口蹄疫、蓝舌病阳性血清的检测均为阴性，说明该方法具有良好的特异性；与ID-Vet公司的cELISA试剂盒对306份临床血清平行检测，两者相对符合率为92.81%。该研究所建立的PPRV H蛋白抗体iELISA检测方法特异、稳定、敏感，操作比cELISA简便快捷，省时省力，可用于临床小反刍兽疫抗体检测。

来源：2021年第1期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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