畜牧兽医学报

作者：杜吉革, 赵炜, 彭国瑞, 李倩琳, 印春生, 姚文生, 张秀坤, 杨柳, 付利芝, 陈小云, 刘莹

单位：1. 中国兽医药品监察所, 北京 100081;2. 重庆市畜牧科学院, 重庆 402460

关键词：腐败梭菌α毒素,基因缺失,跨膜区,无毒力,免疫保护性

基金：动物基因工程疫苗国家重点实验室开放课题（AGVSKL-ZD-201801）；重庆荣昌农牧高新技术产业研发专项（19256）

本研究旨在获得腐败梭菌无毒重组α毒素，并评价其免疫保护性。对已知的腐败梭菌α毒素编码基因进行优化设计和人工合成，获得了缺少第212-222位共11个氨基酸编码序列的基因片段（GCSAΔ11）。将该基因克隆至原核表达载体pET-30a（+）中进行表达与纯化。利用Western blot方法检测获得的重组α毒素（rCSAΔ11）与腐败梭菌天然毒素抗血清的反应性，并采用小鼠检测其毒力。随后，以rCSAΔ11制备疫苗免疫家兔，按照《中华人民共和国兽药典》（2015年版）规定的方法检测家兔血清的中和抗体效价。结果表明，rCSAΔ11可溶表达比例可达46%，且能与腐败梭菌天然毒素抗血清反应。进一步的试验结果显示，rCSAΔ11丧失了对小鼠的毒力，0.1 mL的一免兔血清可中和8~12个小鼠最小致死量（MLD）的腐败梭菌天然毒素；二免兔血清可中和32~45个小鼠MLD的腐败梭菌天然毒素。1个家兔MLD的腐败梭菌天然毒素攻毒后，对照组家兔4/4死亡，免疫组家兔得到了100%（4/4）的保护。综上表明，无毒性的rCSAΔ11保留了良好的免疫保护性，从而为腐败梭菌病基因工程亚单位疫苗的研制提供了重要的试验数据。

来源：2021年第1期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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