畜牧兽医学报

作者：成俊丽, 郝庆玲, 侯淑宁, 朱芷葳, 许冬梅, 李鹏飞

单位：山西农业大学生命科学学院, 太谷 030801

关键词：牛,卵泡,可卡因-苯丙胺调节转录肽,G蛋白偶联受体,质谱分析

基金：国家自然科学基金（31873002）；山西省重点研发计划（一般）农业项目（201703D221020-1）

旨在筛选牛卵泡发育关键负调控因子可卡因-苯丙胺调节转录肽（cocaine and amphetamine regulated transcript peptide，CART）的相互作用蛋白及其受体。本研究采集3头健康母牛双侧卵巢，分离卵泡后刮取颗粒细胞（granulosa cells，GCs）混样；采用跨膜蛋白Extraction试剂盒提取膜蛋白，运用Protein G琼脂糖磁珠与重组CART蛋白、Anti-CART抗体共孵育（n=3）；洗脱CART-蛋白复合物进行二级质谱（LC-MS/MS）分析；获得的蛋白经可信度过滤，利用生物信息学技术对其进行功能聚类分析，通过CELLO V2.5软件对蛋白进行亚细胞定位和跨膜区分析；获得7次跨膜的G蛋白偶联受体（G-protein-coupled receptors，GPCRs），经ProtScale软件分析其胞内外结构区段特点，符合神经肽与受体结合结构特点的GPCR作为CART的候选受体。抽提的膜蛋白经免疫亲和层析（n=3）后，分别鉴定出149、557和298个相互作用蛋白，经筛选剔除重复蛋白，共鉴定出620个蛋白。多数据库集功能富集分析表明，CART相互作用蛋白包含参与信号传导活性的GNAS、GNG8和JUP，参与类固醇生物合成的HSD3B，参与细胞凋亡或增殖调节的OPA1和S100A11，参与Notch信号通路的ERH，这些蛋白或信号通路均与牛卵泡发育密切相关。亚细胞定位和跨膜区分析共获得膜蛋白156个，占总蛋白数的20.53%；其中7次跨膜的GPCRs有8个。经TMHMM分析表明，8个GPCRs中仅ZMPSTE24、HM13和GPR108的N端在胞外，C端在胞内，与神经肽受体的结构特征一致；经PredictProtein结合位点分析表明，ZMPSTE24在5~6跨膜区间的胞内环存在G蛋白结合的位点。ZMPSTE24作为CART的候选受体，有待于分子互作和功能试验进一步加以验证。本研究为牛卵泡CART受体的鉴定奠定了基础，对丰富牛卵泡发育调控理论具有重要意义。

来源：2020年第12期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

查看畜牧兽医学报杂志2020年第12期