畜牧兽医学报

作者：李祎, 王先梅, 杨旭, 邓均华, 王飞, 刘群, 许建海, 刘晶

单位：1. 中国农业大学动物医学院, 国家动物寄生原虫实验室, 北京 100193;2. 中国农业大学动物医学院, 农业部动物流行病学重点实验室, 北京 100193;3. 洛阳普泰生物技术有限公司, 洛阳 471000

关键词：弓形虫急性感染,GRA1单克隆抗体,循环抗原,双抗体夹心ELISA

基金：国家重点研发计划（2017YFD0501304）

弓形虫（Toxoplasma gondii）是一种人畜共患机会性致病原虫，其急性感染可导致宿主产生明显的临床症状和严重的病理损伤。弓形虫致密颗粒蛋白1（dense granuleprotein 1，GRA1）是一种良好的诊断抗原，也是弓形虫急性感染的标志物循环抗原（circulating antigen，CAg）的重要组分。本研究利用TgGRA1单克隆抗体建立双抗体夹心ELISA方法，为急性弓形虫感染的检测提供依据。将免疫GRA1-His的小鼠脾细胞与SP2/0进行融合，筛选出能稳定分泌抗体的杂交瘤细胞。选择其中一种单抗与HRP标记后的鼠源GRA1多抗配对，建立1种双抗体夹心ELISA方法，检测人工感染弓形虫的猪和小鼠血清样品，并将检测效果与巢式PCR（nest PCR，nPCR）和商品化试剂盒进行比较。结果筛选到4株杂交瘤细胞，腹水效价为106~107，亚型均为IgG1；IFA和Western blot结果显示，4株单抗均具有良好的反应性和特异性。选择1G2单抗和HRP标记多抗配对，建立了循环抗原双抗体夹心ELISA方法，最低能够检测到血清中1.563 ng·mL-1 GRA1抗原，或者100 ng·mL-1 ESA。该方法与nPCR相比具有较高的一致性，较市售商品化试剂盒更为准确可靠。本研究第1次将GRA1抗原作为急性弓形虫感染的诊断指标，建立相应的检测方法，成功地在人工感染样品中检测到弓形虫急性感染，可为弓形虫急性感染的诊断提供参考，对临床上急性弓形虫病的治疗有指导意义。

来源：2020年第12期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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