畜牧兽医学报

作者：陈芳芳, 谭红黎, 钱艳红, 桂亚萍, 于凤梅, 查丽莎

单位：安徽农业大学动物分子与应用免疫创新团队, 合肥 230036

关键词：Ii,晚期内吞体,Rab7b,突变,共定位

基金：国家自然科学基金（31572496）

Rab蛋白是介导胞内活性蛋白转运的分子家族。恒定链（invariant chain，Ii）具有协助抗原肽转运、B细胞成熟和作为细胞因子的受体等免疫学功能。前期研究发现，鸡（Gallus gallus）Rab5a在细胞早期内吞体中与Ii结合，但不清楚是否还有其他转运蛋白有该特性。基于Rab7b分子定位于晚期内吞体，并与胞内分子转运相关，本研究探索了鸡Rab7b与Ii结合的分子结构特征。首先，用自行设计的引物扩增了鸡和小鼠（Mus musculus）Rab7b基因，并进行了氨基酸同源性比对分析；构建了含鸡Rab7b及其67位氨基酸突变体Rab7bQ67L的原核和真核重组质粒。其次，将含红色荧光蛋白和目的基因的重组质粒转染鼠巨噬细胞系Raw264.7，培养后用绿色荧光素（FITC）标记的鼠抗晚期内吞体蛋白1（LAMP1）抗体染色，观察目的蛋白在内吞体的定位。进一步将鸡Rab7b和Rab7bQ67L分别与Ii共转染293T细胞，观察它们与Ii的共定位。最后用拉下法和免疫印迹检测鸡Rab7b及Rab7bQ67L与Ii的结合。结果表明，所克隆获得的鸡Rab7b基因与预期大小一致，其开放阅读框为624 bp，编码208个氨基酸。鸡和鼠的Rab7b蛋白质结构相似性为74%。尽管鸡Rab7b和突变体Rab7bQ67L均能结合Ii，但只有Rab7b可以定位于晚期内吞体，而突变体却改变了该定位特性。综上所述，鸡Rab7b与Ii不仅在晚期内吞体共定位，而且还能互相结合；鸡Rab7b的第67位氨基酸影响其在细胞内定位而不影响与Ii结合。综上表明，Rab分子参与了Ii在细胞内细胞器的转运，为进一步研究Ii在细胞内的转运机制提供了新的途径。

来源：2020年第12期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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