畜牧兽医学报

作者：杜吉革, 朱真, 徐中清, 李倩琳, 姚文生, 李启红, 印春生, 杨柳, 付利芝, 陈小云, 刘莹, 薛麒

单位：1. 中国兽医药品监察所, 北京 100081;2. 重庆市畜牧科学院, 重庆 402460

关键词：产气荚膜梭菌CPB,突变,Th细胞表位,鞭毛蛋白,毒力,免疫保护性

基金：动物基因工程疫苗国家重点实验室开放课题（AGVSKL-ZD-201801）；重庆荣昌农牧高新技术产业研发专项（19256）；中国兽医药品监察所所级课题（201810）

旨在获得产气荚膜梭菌β毒素（CPB）的重组突变体，并评价其毒力及免疫保护性。对已知的产气荚膜梭菌CPB编码基因进行优化设计，同时引入4个氨基酸突变位点，分别是第212位的精氨酸突变为谷氨酸，第268位的亮氨酸突变为甘氨酸，266位的酪氨酸和275位的色氨酸突变为丙氨酸。此外，在该基因5'端添加Th细胞表位（T）和鞭毛蛋白（flagellin）N末端的编码序列，经人工合成获得重组基因片段（GTFNCPBm4）。将GTFNCPBm4克隆至原核表达载体pET-30a（＋）中进行表达与纯化，获得重组蛋白rTFNCPBm4。利用Western blot方法检测rTFNCPBm4与C型产气荚膜梭菌毒素抗血清的反应性，并检测rTFNCPBm4对小鼠的毒力。随后，以rTFNCPBm4免疫家兔，按照《中华人民共和国兽药典》（2015年版）规定的方法检测家兔血清对C型产气荚膜梭菌毒素的中和抗体效价。结果表明，rTFNCPBm4主要以包涵体的形式表达且能与C型产气荚膜梭菌毒素抗血清反应。小鼠安全性试验显示，50 μg的rTFNCPBm4对小鼠仍无致死性；免疫rTFNCPBm4后，每毫升家兔二免抗血清可中和10~20个小鼠最小致死量（MLD）的C型产气荚膜梭菌毒素；1个家兔MLD的C型产气荚膜梭菌毒素攻毒后，对照组家兔4/4死亡，免疫组家兔得到了100%（4/4）的保护。以上结果说明，rTFNCPBm4在丧失毒力的同时保留了良好的免疫原性，从而为C型产气荚膜梭菌病基因工程疫苗的研制提供了重要的数据。

来源：2020年第11期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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