畜牧兽医学报

作者：包世俊, 朱彩宏, 邢小勇, 丁小琴, 温峰琴, 武小椿, 薛惠文

单位：甘肃农业大学动物医学院, 兰州 730070

关键词：牛支原体,nox2基因,原核表达,功能分析

基金：甘肃农业大学学科建设基金项目（GAU-XKJS-2018-062）；甘肃省教育厅产业支撑引导项目（2019C-03）；国家肉牛/牦牛产业技术体系项目（CARS-37）

旨在探究牛支原体（Mycoplasma bovis，Mb）NADH氧化酶NOX2的生物学功能，本研究参照GenBank中Mb湖北分离株（Mb Hubei-1 strain）nox2基因序列设计引物，应用PCR扩增获得Mb临洮分离株的nox2基因，在测序及序列优化的基础上，构建原核表达载体pET-nox2，并在大肠杆菌Rosetta（DE3）中诱导表达，进而对表达产物rMbNOX2的酶促活性、免疫原性，NOX2在Mb内的分布，rMbNOX2抗血清的补体介导体外杀菌活性和对Mb黏附宿主细胞的抑制活性进行了分析。结果表明，Mb临洮株nox2基因全长1 350 bp，与GenBank中已知序列的Mb nox2基因序列比较，除Mb JF4278株相似性为97.93%外，其余均为99.93%。SDS-PAGE结果显示，优化的nox2基因在大肠杆菌中成功表达，重组蛋白rMbNOX2相对分子质量约为67 ku，且具有良好的酶促活性；ELISA与Western blot结果显示，rMbNOX2具有良好的免疫原性，且Mb NOX2在细胞浆中的分布多于细胞膜；补体介导的体外杀菌试验及黏附抑制试验证实，rMbNOX2抗血清具有明显的补体介导杀支原体活性，并可有效抑制Mb对宿主细胞的黏附。本研究为深入探讨Mb NOX2生物学功能奠定了基础。

来源：2020年第11期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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