畜牧兽医学报

作者：周晓慧, 肖景景, 张鑫宇, 张泉, 夏晓莉, 孙怀昌

单位：1. 扬州大学兽医学院, 江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心, 扬州 225009;2. 江苏农牧职业技术学院, 泰州 225300

关键词：非洲猪瘟病毒,CD2v蛋白,强免疫原性抗原,初步应用

基金：国家重点研发计划项目（2017YFD0502303；2018YFC0840404-3）；江苏高校优势学科建设工程资助项目（PAPD）

旨在获得非洲猪瘟病毒（ASFV）强免疫原性重组CD2v抗原，利用生物信息学软件进行CD2v抗原指数分析，将其细胞质内免疫显性区与类弹性蛋白多肽（ELP）在重组大肠杆菌中进行融合表达，对ELP-CD2v融合蛋白的相变循环（ITC）条件进行优化，在优化条件下进行融合蛋白纯化，利用烟草蚀纹病毒（TEV）蛋白酶活性包涵体切除ELP标签，通过免疫转印法对重组CD2v抗原进行鉴定，利用重组CD2v抗原建立ELISA抗体检测方法，与多抗原ELISA对ASFV抗体阳性和阴性血清进行平行检测。结果显示，ELP-CD2v融合蛋白获得正确、可溶性表达，ITC条件为28℃和1.5 mol·L-1 NaCl，在0.2% Triton X-100存在下进行ITC，纯化的融合蛋白纯度为76.3%；TEV蛋白酶活性包涵体能有效切割ELP标签，再次ITC回收的重组CD2v抗原纯度为91.7%，能被ASFV抗体识别；根据多抗原ELISA检测结果选择血清样品，用重组CD2v抗原ELISA进行检测，结果显示，15份ASFV抗体阴性血清均为CD2v抗体检测阴性，15份ASFV抗体阳性血清均为CD2v抗体检测阳性。这些研究结果表明，ASFV的CD2v蛋白胞内区存在强免疫原性表位，其重组抗原有望用于CD2v的抗体检测。

来源：2020年第10期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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