畜牧兽医学报

作者：徐兆坤, 王健宏, 李武, 王玉炯

单位：1. 宁夏大学西部特色生物资源保护与利用教育部重点实验室, 银川 750021;2. 宁夏大学生命科学学院, 银川 750021

关键词：重组CFP10蛋白,A549细胞,TLRs信号途径,炎症因子

基金：国家自然科学基金项目（31760724；31560678；31772710）；宁夏大学研究生创新项目（GIP2018039）；宁夏自然科学基金（2020AAC03110）

本研究旨在检测重组结核分枝杆菌10 ku培养滤液蛋白（culture filtrate protein 10，CFP10）对肺泡Ⅱ型上皮细胞系A549细胞Toll样受体（TLRs）信号途径及其介导的炎症反应的影响。PCR扩增cfp10目的基因片段，构建重组质粒载体pCzn1-CFP10。将重组质粒pCzn1-CFP10转入BL21（DE3）大肠杆菌感受态细胞，IPTG诱导表达重组蛋白CFP10（rCFP10）并鉴定，纯化rCFP10，去除内毒素及脱盐备用。设置对照组，利用MTT检测rCFP10对A549细胞的存活率的影响；通过qRT-PCR、Western blot及ELISA等技术，分别在转录和翻译水平检测rCFP10对A549细胞TLRs信号途径关键分子及其下游炎症因子表达的影响。结果显示，成功构建重组表达载体pCzn1-CFP10并表达纯化出高纯度的rCFP10。MTT结果显示，随着rCFP10浓度增加和处理时间延长，A549细胞存活率显著降低。与空白对照组相比，rCFP10分别从转录和翻译水平显著（P<0.05）或极显著（P<0.01）上调A549细胞中TLRs途径关键分子TLR2、TLR4、MyD88、TRAF6和NF-κB p65及下游炎症因子IL-6、TNF-α的表达水平。rCFP10蛋白可以通过激活A549细胞TLRs受体信号途径促进细胞炎症因子的分泌，这将为进一步加深理解结核病发病机制提供理论依据。

来源：2020年第10期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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