畜牧兽医学报

作者：张艳芳, 谢芝勋, 曾婷婷, 刘加波, 谢丽基, 邓显文, 谢志勤, 罗思思, 黄娇玲, 王盛

单位：广西壮族自治区兽医研究所 广西兽医生物技术重点实验室, 南宁 530001

关键词：食源性致病菌,GeXP,多重PCR,特异性嵌合引物

基金：广西自然科学青年基金项目（2017GXNSFBA198097）；广西科技重大专项（桂科AA17204057）；广西“八桂学者”专项（2019-79）；国家“万人计划”领军人才专项（W02060083）

本研究旨在建立一种能够同时鉴别包括大肠杆菌O157：H7、沙门菌、空肠弯曲菌、单核细胞增生李斯特菌、霍乱弧菌、副溶血弧菌和金黄色葡萄球菌7种常见食源性致病菌的GeXP多重PCR检测方法。根据这些致病菌在GenBank上公布的保守基因序列，设计合成了7对特异性GeXP引物。用单一或混合细菌样品的DNA模板优化反应条件，设置对照组，构建重组质粒，随机组合不同浓度的样品，验证所建立的GeXP方法的特异性、敏感性和准确性。最后用该方法检测120份临床样品，进一步验证所建立的GeXP检测方法的准确性和可靠性。结果显示，单一或混合模板的GeXP检测均能特异性出现相应清晰峰值，可在103拷贝·μL-1水平上同时特异地检测出7种细菌病原体，不同浓度模板混合时，本试验所建立的方法依然可检测出对应病原体。检测120份临床样品，GeXP多重PCR阳性率为2.50%（3/120）~15.83%（19/120），普通PCR阳性率为2.50%（3/120）~15.00%（18/120），GeXP多重PCR多检出8份阳性，表明GeXP方法更为敏感与准确。本研究建立的同时鉴别7种食源性致病菌的GeXP多重PCR检测方法，具有高通量、特异性强和敏感性高的特点，为食源性常见致病菌感染或混合感染提供了快速分子诊断方法。

来源：2020年第10期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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