畜牧兽医学报

作者：宋瑞其, 呼尔查, 翟雪洁, 樊新丽, 李敏, 张梦圆, 宋晶晶, 阿尔曼·海热, 吾力江·卡马力, 巴音查汗·盖力克

单位：1. 新疆农业大学动物科学学院, 乌鲁木齐 830052;2. 新疆农业大学动物医学学院, 乌鲁木齐 830052

关键词：马泰勒虫,驽巴贝斯虫,半胱氨酸蛋白酶,原核表达,进化树分析,生物信息学分析

基金：自治区研究生科研创新项目（XJ2019G141）

旨在克隆、表达马泰勒虫（Theileria equi）和驽巴贝斯虫（Babesia caballi）半胱氨酸蛋白酶（cystein protease，CP）基因，并对其进行生物信息学预测和分析。提取马泰勒虫和驽巴贝斯虫的DNA，以此为模板扩增目的基因。利用克隆技术和原核表达系统克隆表达CP，用尿素透析法进行纯化。通过Dot blot验证其与相应阳性血清特异性反应。应用MAGA软件和Prot Param、TMHMM、SignalP-5.0、Antibody Epitope Prediction、SYFPEITHⅡ、ProPred及EzMol2.1等在线分析软件分析T.equi-CP和B.caballi-CP的基因及其蛋白序列。成功构建了重组质粒GST-T.equi-CP和GST-B.caballi-CP，经SDS-PAGE试验结果显示该基因表达的蛋白以包涵体形式高效表达，并能与相应阳性血清特异性反应。对T.equi-CP和B.caballi-CP基因编码蛋白进行系统发育分析发现，与其他原虫物种相比，系统发育分析结果与其原生动物学分类结果一致。经生物信息学分析预测显示，两个CP蛋白为亲水性蛋白，无跨膜区，不属于跨膜蛋白，无Th细胞表位，在细胞质、线粒体和细胞核中定位较多。其中T.equi-CP蛋白的相对分子质量为29 948.60，等电点为5.53，稳定系数为22.50。B.caballi-CP蛋白的相对分子质量为14 603.62，等电点为8.54，稳定系数为47.69，有信号肽区域。T.equi-CP和B.caballi-CP蛋白具有良好的反应原性，作为亲水性膜外蛋白，无Th细胞表位，在细胞质、线粒体和细胞核中定位较多等，可能说明CP在马梨形虫逃避宿主免疫反应，参与增殖、分化及程序性细胞死亡等发挥作用。本研究为T.equi-CP和B.caballi-CP蛋白的功能研究与马梨形虫的致病机制研究提供了理论依据。

来源：2020年第10期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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