畜牧兽医学报

作者：张磊, 阿果约达, 谢拉准, 吴锦波, 李键, 熊显荣

单位：1. 西南民族大学生命科学与技术学院, 成都 610041;2. 青藏高原动物遗传资源保护与利用国家教育部重点实验室, 成都 610041;3. 红原县科学技术和农业畜牧局, 阿坝 624400;4. 四川省阿坝州畜牧科学研究院, 阿坝 623000

关键词：牦牛,支持细胞,IGF-II,干扰,细胞增殖

基金：国家“十三五”重点研发专项（2018YFD0502304）；西南民族大学中央高校基本科研业务费专项资金项目（2019NQN45）

旨在构建干扰胰岛素样生长因子（insulin-like growth factor-II，IGF-II）的重组质粒载体，研究IGF-II对牦牛睾丸支持细胞的影响。本研究设计并合成针对牦牛IGF-II的shRNA寡核苷酸，并将其克隆至pLKO.1质粒载体上，转染牦牛睾丸支持细胞后经嘌呤霉素筛选获得稳定的细胞株，并采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）和蛋白免疫印迹法检测IGF-II基因和蛋白的表达，采用细胞生长分析仪分析支持细胞的增殖凋亡情况。结果显示，干扰牦牛IGF-II表达的pLKO.1质粒载体构建成功，其可在睾丸支持细胞中稳定表达，且能有效抑制IGF-II基因的表达。与对照组相比，pLKO.1-shRNA2的干扰效率最显著，IGF-Ⅱ的表达量下调至19.1%（P<0.05），且pLKO.1-shRNA2可使内源性IGF-II蛋白的表达量减少76.3%（P<0.05）。pLKO.1-shRNA2质粒转染及筛选得到的稳定细胞株培养48 h后的细胞分裂增殖活性显著低于对照组（P<0.05）。qRT-PCR结果显示，干扰内源性IGF-II后，睾丸支持细胞中的IGF-I和IGF-IIR基因表达出现了显著的上调（P<0.05），IGF-IR与Bcl-2的表达出现了显著的下调（P<0.05）。综上表明，牦牛IGF-II干扰质粒构建成功，其转染至牦牛睾丸支持细胞有效抑制了IGF-II的表达，改变了IGF-IR与Bcl-2的表达模式，潜在影响了牦牛支持细胞的分裂增殖，具体作用机制有待进一步研究。

来源：2020年第9期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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