畜牧兽医学报

作者：王书博, 徐义刚, 陈秋艳, 梅朱园, 崔文, 姜艳平, 周晗, 王丽, 乔薪瑗, 李一经, 唐丽杰

单位：1. 东北农业大学 动物医学学院, 哈尔滨 150030;2. 农业部动物疫病病原生物学重点实验室东北科学观测实验站, 哈尔滨 150030

关键词：猪圆环病毒2型,cap蛋白,重组罗伊氏乳酸杆菌,免疫应答

基金：“十三五”国家重点研发计划（2017YFD0501100）

旨在构建表达猪圆环病毒2型（PCV2）cap蛋白的重组罗伊氏乳酸杆菌（Lactobacillus reuteri，L.reuteri），并评价其在小鼠体内诱导的免疫应答效果。利用PCR扩增实验室分离保存的PCV2b型毒株的cap蛋白基因，以猪源L.reuteri为宿主菌，构建表达cap蛋白的重组菌株pPG-T7 g10-PPT-cap/L.reuteri，通过口服免疫BALB/c小鼠。采用间接ELISA方法测定免疫后小鼠血清中抗原特异性IgG抗体水平，粪便、鼻腔洗液、生殖道洗液、肠黏液中抗原特异性sIgA抗体水平，小鼠血清中各细胞因子水平；MTT法检测小鼠脾淋巴细胞增殖水平；流式细胞技术检测小鼠脾淋巴细胞中CD4+T细胞、CD8+T细胞的水平；荧光定量PCR检测免疫后攻毒的小鼠体内器官的病毒载量。结果显示，口服免疫重组乳酸菌组小鼠血清IgG抗体水平显著高于对照组（P<0.01）；小鼠粪便、鼻腔洗液、生殖道洗液、肠黏液中sIgA抗体水平显著高于对照组（P<0.01）；小鼠血清中细胞因子水平和对照组相比，IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-12水平升高，IL-10水平降低，IFN-α无显著变化；体外孵育PCV2和小鼠脾淋巴细胞结果表明，重组乳酸菌组小鼠脾淋巴细胞增殖刺激指数显著高于对照组（P<0.01）；流式细胞技术检测结果显示，口服免疫重组乳酸菌组小鼠脾细胞中CD4+T细胞、CD8+T细胞含量高于对照组；荧光定量PCR结果显示，相比于对照组，口服免疫重组乳酸菌组小鼠体内的病毒载量明显低于对照组。综上所述，本研究成功构建了表达PCV2 cap蛋白的重组罗伊氏乳酸杆菌，经口服途径免疫动物，构建的重组乳酸杆菌能够刺激小鼠产生体液免疫和细胞免疫应答，且具有一定的免疫保护效果。

来源：2020年第9期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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