畜牧兽医学报

作者：苏芮, 滕蔓, 李会珍, 郑鹿平, 刘豪丽, 刘金玲, 朱志坚, 罗俊, 张改平

单位：1. 河南农业大学牧医工程学院, 郑州 450002;2. 河南省农业科学院动物免疫学重点实验室, 农业部动物免疫学重点实验室, 河南省动物免疫学重点实验室, 郑州 450002;3. 河南省农业科学院, 中英禽病国际研究中心, 郑州 450002;4. 河南科技大学动物科技学院, 动物疫病与公共安全重点实验室, 洛阳 471003;5. 扬州大学江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心, 扬州 225009

关键词：MDV,miRNA,宿主靶基因,肿瘤发生,hybrid-PCR

基金：国家自然科学基金（U1604232；31602050）；中原千人计划-中原基础研究领军人才；河南省重点研发与推广专项（192102110072）；河南省农业科学院杰出青年科技基金（2019JQ01）

血清1型马立克病病毒（MDV-1）感染引起的鸡马立克病（MD）一直以来被认为是研究病毒诱导肿瘤发生机制的理想模型。此前研究发现，MDV-1编码的miR-M4-5p是宿主癌基因miR-155的病毒同源物，从基因组中敲除miR-M4-5p可显著降低MDV-1的致病性和致瘤性，表明miR-M4-5p可能是MDV-1诱导肿瘤发生的重要调控因子。为进一步揭示miR-M4-5p的调控机制，以CEF细胞总RNA反转录产物cDNA为模板，利用hybrid-PCR技术构建了miR-M4-5p的候选靶基因文库。通过基因克隆、PCR鉴定及序列比对分析，获得128个候选基因序列，有73个基因的3'-UTR存在miR-M4-5p的潜在结合靶点，其中23个3'-UTR结合靶点与miR-M4-5p完全互补配对。通过双荧光素酶报告试验和qRT-PCR分析，对miR-M4-5p与3'-UTR的体内外相互作用以及候选靶基因的表达水平进行分析和验证，最终鉴定DPT、TMEM230和DCLK1为miR-M4-5p调控的宿主靶基因。本研究为后续进一步阐明miR-M4-5p在MD肿瘤发生中的调控机制奠定了重要基础。

来源：2020年第8期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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