畜牧兽医学报

作者：王书利, 张慧茹, 毕艳琪, 王德娟, 陈琳, 张晓婷, 李志强

单位：商丘师范学院生物与食品学院, 商丘 476000

关键词：布鲁菌,HFQ,免疫反应

基金：国家自然科学基金（31602080）

旨在分析布鲁菌（Brucella）转录调节因子HFQ诱导机体产生的免疫反应。以热灭活牛种布鲁菌S2308为模板，根据GenBank登录的S2308 hfq基因序列（BAB1_1134）设计引物，PCR扩增hfq基因片段后，将其克隆至原核表达载体pET-32a，转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞，诱导HFQ蛋白表达；利用SDS-PAGE电泳以及Western blot对重组HFQ蛋白（rHFQ）进行分析；pET-32a空载体、rHFQ和疫苗株M5-90刺激小鼠巨噬细胞RAW 264.7，利用ELISA试剂盒检测细胞因子IFN-γ和IL-4的表达水平；将pET-32a、rHFQ和M5-90免疫小鼠后，检测小鼠脾细胞中IFN-γ和IL-4的水平，以及小鼠血清中IgG抗体水平。结果显示，hfq基因大小为237 bp，编码79个氨基酸，rHFQ大约在25.8 ku处出现蛋白条带，纯化后为单一条带。Western blot结果显示，rHFQ具有较好的反应原性。rHFQ刺激RAW 264.7后，诱导IFN-γ和IL-4的水平与M5-90组相似，显著高于PBS组和pET-32a空载体组，且随着刺激时间的延长而升高。rHFQ免疫小鼠后，诱导脾细胞产生IFN-γ和IL-4的水平，小鼠血清中IgG的水平与M5-90组相似，显著高于PBS组和pET-32a空载体组。布鲁菌HFQ蛋白具有较好的反应原性，并能诱导机体产生较高的细胞免疫和体液免疫水平，是布鲁菌亚单位疫苗研制较理想的候选抗原。

来源：2020年第8期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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