畜牧兽医学报

作者：周志楠, 陈祥, 敖叶, 洪磊, 唐文, 陈浩瀚

单位：1. 贵州大学高原山地动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室, 贵州省动物遗传育种与繁殖重点实验室, 贵阳 550025;2. 贵州大学动物科学学院, 贵阳 550025

关键词：黔北麻羊,RARRES1基因,超表达载体,干扰载体,卵泡颗粒细胞

基金：国家自然科学基金（31760652）；贵州省科技重大专项（黔科合重大专项字[2016]3002号）

旨在对黔北麻羊视黄酸受体应答蛋白1（retinoic acid receptor responder 1，RARRES1）基因的功能进行初步探究。本研究首先利用PCR扩增克隆得到黔北麻羊RARRES1基因编码的完整序列，应用生物信息学方法分析黔北麻羊RARRES1蛋白理化性质、高级结构、疏水性、氨基酸同源性及亚细胞定位，并构建系统进化树，同时应用qRT-PCR法检测RARRES1基因在单、多羔黔北麻羊不同组织中的表达水平，随后构建目的基因pEGFP-N3-RARRES1真核表达载体与pGPH1/GFP/Neo-RARRES1 RNA干扰载体，并转染至黔北麻羊卵泡颗粒细胞，利用qRT-PCR法从细胞水平检测并分析目的基因真核表达载体与RNA干扰载体对目的基因RARRES1及多胎性状候选基因BMPR-IB mRNA表达的影响。qRT-PCR结果显示，RARRES1 mRNA在卵巢中的表达量最高，单羔组黔北麻羊卵巢组织中的表达量极显著高于多羔组（P<0.01）。生物信息学分析表明，黔北麻羊RARRES1基因共编码289个氨基酸，RARRES1是一种定位在细胞质中的亲水性蛋白，蛋白质二级结构分析显示，其主要是由α-螺旋与无规则卷曲构成，三级结构预测与二级结构分析一致；同源性以及系统进化树结果显示，黔北麻羊RARRES1基因序列与绵羊、牛的同源性高、遗传距离近，与鸡的同源性最低、遗传距离最远。经双酶切、测序验证后，表明目的基因pEGFP-N3-RARRES1真核表达载体与pGPH1/GFP/Neo-RARRES1干扰载体构建成功。将各载体转染至黔北麻羊卵泡颗粒细胞后，与空白对照相比，重组质粒pEGFP-N3-RARRES1能极显著提高RARRES1与BMPR-IB的表达量（P<0.01）。在各干扰载体中，重组质粒pGPH1/GFP/Neo-RARRES1-4的抑制效率最好，能够显著与极显著下调RARRES1与BMPR-IB mRNA在卵泡颗粒细胞中的表达量（P<0.05，P<0.01）。本研究克隆了黔北麻羊RARRES1基因编码的完整序列并进行了生物信息学分析。将重组质粒pEGFP-N3-RARRES1、pGPH1/GFP/Neo-RARRES1成功转染至黔北麻羊卵泡颗粒细胞并验证其表达变化。结果表明，RARRES1可能对山羊多胎性状具有促进作用，为进一步探究RARRES1基因对山羊多胎性状的调控机理提供依据。

来源：2020年第7期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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