畜牧兽医学报

作者：韩玉莹, 谢利豹, 李永锋, 仇华吉

单位：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 兽医生物技术国家重点实验室, 哈尔滨 150069

关键词：猪瘟病毒,C株,Npro蛋白,增强型绿色荧光蛋白,生物学特性

基金：国家自然科学基金（31772774；31630080）

猪瘟兔化弱毒疫苗C株是我国自主研发的，用于预防猪瘟（CSF）的最好弱毒活疫苗。然而，现阶段的C株不具备标记功能，无法区分野毒感染与疫苗接种。本研究旨在将增强型绿色荧光蛋白（EGFP）编码基因插入猪瘟病毒（CSFV）C株将其构建为报告病毒，为C株的基础研究提供病毒示踪工具，同时提供构建标记C株疫苗的方法。本研究中，笔者在CSFV C株中引入EGFP基因，分别构建了表达增强型绿色荧光蛋白（EGFP）的报告CSFV rHCLV-EGFP，以及用CSFV强毒Shimen（SM）株Npro基因替换C株Npro基因后再引入EGFP基因的嵌合报告病毒rHCLV-Npro（SM）-EGFP。通过猪瘟抗原ELISA检测，直接观察荧光及Western blot检测EGFP的蛋白表达等方法对拯救的病毒进行鉴定，并在细胞和家兔上评价这两株病毒的生物学特性。结果显示，两株报告病毒的抗原ELISA结果均为阳性；在感染rHCLV-EGFP的细胞中并未观察到绿色荧光也未检测到EGFP蛋白，但在感染rHCLV-Npro（SM）-EGFP的细胞中观察到EGFP的绿色荧光并检测到EGFP蛋白；细胞试验结果表明，两株报告病毒与亲本病毒具有相似的生长特性且遗传稳定；家兔试验发现，rHCLV-Npro（SM）-EGFP保留了C株的在家兔体内的生物学特性，但rHCLV-EGFP失去了C株诱导家兔定型热反应的能力。构建的嵌合报告病毒rHCLV-Npro（SM）-EGFP可以作为C株的报告病毒进行应用：可以对病毒示踪，用于研究C株的复制过程、病毒与细胞的相互作用；同时，该嵌合报告病毒也具备发展为标记C株疫苗的潜力。?

来源：2020年第7期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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