畜牧兽医学报

作者：冯宇, 殷鑫欢, 杨晓宇, 徐雷, 徐志文, 朱玲

单位：1. 四川农业大学动物医学院, 成都 611130;2. 动物生物技术中心, 成都 611130

关键词：猪δ冠状病毒,重组M蛋白,原核表达,间接ELISA

基金：“十三五”国家重点计划（2018YFD051102）；四川省科技支撑计划（2018NZ0150）；“十三五”育种攻关计划（2016NYZ0052）；国家农业产业技术体系四川兽药创新团队专项（CARS-SVDIP）

本研究旨在建立一种可靠的检测猪δ冠状病毒（porcine deltacoronavirus，PDCoV）IgG抗体的间接ELISA方法，了解四川地区PDCoV的流行情况。采用原核表达系统表达PDCoV膜蛋白（M）作为检测抗原，通过反应条件的优化，建立了基于PDCoV M蛋白的间接ELISA方法，命名为PDCoV-rM-ELISA，并用该方法对430份临床样品进行检测。成功构建了重组表达菌BL21-pET-32a-M，经诱导表达后获得了重组M蛋白，Western bolt检测表明，重组蛋白具有良好的反应原性。以其作为包被抗原建立的PDCoV-rM-ELISA方法仅对PDCoV血清检测为阳性，与猪流行性腹泻病毒等5种猪常见病原阳性血清均无交叉反应，具有良好的特异性；该方法灵敏性高、重复性好，批间和批内重复性变异系数均小于10%；与成品化PDCoV抗体检测试剂盒同时检测48份临床血清，两种方法的阳性符合率为88.46%，阴性符合率为90.91%，总符合率为89.58%。临床样品检测结果表明，各地样本PDCoV抗体阳性率平均为11.86%，且统计学分析显示，母猪比仔猪和育肥猪高2.25倍的PDCoV感染概率。笔者成功表达了PDCoV M蛋白，建立了PDCoV-rM-ELISA检测方法，该方法具有较高的敏感性、良好的特异性和重复性，可用于临床猪血清样品种PDCoV IgG抗体的检测。

来源：2020年第7期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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