畜牧兽医学报

作者：张利环, 马悦悦, 刘文艳, 蓝吴涛, 朱芷葳

单位：山西农业大学生命科学学院, 太谷 030801

关键词：miR-96-5p,MITF,miRNAs预测,靶基因验证

基金：国家自然科学基金（31402156）；山西省重点研发计划项目（201803D31062；201803D221023-2）；山西农业大学科技创新基金项目（2016ZZ07）；山西农业大学青年拔尖创新人才支持计划（TYIT201403）

旨在预测并验证调控小眼畸形相关转录因子（microphthalmia-associated transcription factor， MITF）基因表达的关键miRNA。使用在线软件对与MITF具有靶向关系的miRNAs进行预测。在羊驼黑色素细胞中，利用荧光定量PCR检测过表达和抑制表达miR-96-5p后MITF基因的表达量；通过免疫细胞化学技术对过表达和抑制表达miR-96-5p的细胞进行MITF特异抗体的染色。结果表明，miR-96-5p是调控MITF表达的一个关键miRNA，经荧光定量PCR、免疫细胞化学技术检测，当过表达miR-96-5p后，MITF mRNA水平不变，但其下游基因表达量极显著降低（P<0.01），MITF蛋白水平表达量与其下游基因的蛋白水平表达量全部极显著低于空白组（P<0.01），当抑制表达miRNA-96-5p后，MITF mRNA水平不变，但其下游基因表达量显著升高（P<0.01），MITF蛋白水平表达量与其下游基因的蛋白水平表达量全部极显著高于空白组（P<0.01）。miR-96-5p可以靶向结合MITF基因，在MITF转录后水平发挥调控作用，抑制MITF的转录，抑制MITF及其下游基因TYR、TYRP1、TYRP2的表达。

来源：2020年第6期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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