畜牧兽医学报

作者：伍海英, 唐婷, 张旭, 潘奕良, 郭壮, 全淑芬, 陈丽丽

单位：1. 南华大学第二附属医院, 衡阳 421001;2 南华大学公共卫生学院, 衡阳 421001

关键词：鹦鹉热衣原体,Ⅲ型分泌系统,效应蛋白,包涵体膜蛋白

基金：国家自然科学基金（31600150）；湖南省大学生研究性学习与创新性实验计划项目（张旭）；湖南省教育厅一般项目（18C0457）

旨在分析预测的10种鹦鹉热衣原体（Chlamydia psittaci，Cps）Ⅲ型分泌系统效应蛋白在细胞内的定位，为下一步研究其结构与功能奠定基础。本研究利用计算机辅助的生物信息学方法（Effective T3和BPBAac tool）预测Cps T3SS效应蛋白。利用分子克隆技术构建重组质粒pGEX-6P-1/目的基因，诱导表达、纯化相应重组蛋白。皮下免疫BALB/c小鼠，制备各重组蛋白的多克隆抗体，ELISA测定其效价。以制备的多克隆抗体为一抗，应用间接免疫荧光法检测假定的效应蛋白在感染细胞中的定位。本研究通过应用Effective T3、BPBAac tool交叉验证，预测了14个Cps T3SS效应蛋白编码基因：CPSIT_0357、CPSIT_0429、CPSIT_0461、CPSIT_0463、CPSIT_0490、CPSIT_0594、CPSIT_0785、CPSIT_0844、CPSIT_0846、CPSIT_0019、CPSIT_0020、CPSIT_0968、CPSIT_0969、CPSIT_0942，并进行分析。构建了14个靶基因的重组质粒，经IPTG诱导，除CPSIT_0357、CPSIT_0429、CPSIT_0968、CPSIT_0969外，其他10个重组菌分别表达了相对分子质量（Mr）与预测Mr相近的可溶性蛋白。经GST树脂纯化后，将重组蛋白免疫雌性BALB/c小鼠，血清抗体效价为（1：32 000）~（1：64 000）。IFA细胞内定位观察，发现CPSIT_0844和CPSIT_0846位于包涵体膜，而CPSIT_0461、CPSIT_0463、CPSIT_0490、CPSIT_0594、CPSIT_0785、CPSIT_0019、CPSIT_0020、CPSIT_0942位于包涵体内。本研究鉴定了2种定位于衣原体包涵体膜的效应蛋白和8种定位于衣原体包涵体中的效应蛋白。

来源：2020年第6期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

查看畜牧兽医学报杂志2020年第6期