畜牧兽医学报

作者：孙盼盼, 时建立, 彭喆, 王硕, 王妍, 吴晓燕, 徐绍建, 李俊

单位：1. 青岛农业大学, 青岛 266000;2. 山东省农业科学院 畜牧兽医研究所, 济南 250100;3. 山东师范大学, 济南 250014

关键词：猪肺炎支原体,环介导等温扩增技术,横向流动试纸条,诊断

基金：山东省生猪产业技术体系疫病控制岗位（SDAIT-08-07）；山东省重大科技创新工程项目（2019JZZY010720）；“十三五”重点研发计划（2016YFD0500708）；山东省农业重大应用技术创新项目（SD2019XM003；SD2019XM006）

旨在采用环介导等温扩增（LAMP）和横向流动试纸条（LFD）相结合的方法，建立一种快速、特异，过程可视化的猪肺炎支原体（Mycoplasma hyopneumoniae，Mhp）检测方法。针对猪肺炎支原体（Mhp）P36基因设计5套特异性引物和1条异硫氰酸荧光素（FITC）标记的探针，进行LAMP扩增反应。将生物素标记的LAMP产物与FITC标记的探针进行特异性杂交，并使用横向流动试纸条完成扩增产物的检测。经优化，LAMP最佳反应条件为65℃，反应15 min，从基因组DNA提取到LFD结果判断只需40 min左右，比常规PCR技术缩短近2 h。LAMP-LFD可特异性地检出猪肺炎支原体（Mhp），对猪鼻支原体（Mhr）及猪圆环病毒（PCV）等常见猪病病原的检测结果为阴性。灵敏性试验表明，LAMP-LFD对Mhp的检测灵敏度为1×100个拷贝DNA，是普通PCR的1 000倍。利用本方法可从采集的88份临床疑似病料样品中检测到64份阳性，国标PCR方法可检测到56份阳性，符合率可达90.9%。综上，本研究建立的LAMP-LFD方法可特异、准确地应用于Mhp的检测，而且灵敏度高、操作简单、仪器设备依赖性低、检测成本低、耗时短，适合基层实验室、应急检测或现场监测等使用，具有较高的推广价值，有望发展成为Mhp快速检测的有效手段。

来源：2020年第6期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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