畜牧兽医学报

作者：韩高链, 郭丽荣, 李孟心, 郑腾飞, 李俊玲, 秦健, 杜荣

单位：1. 山西农业大学动物科技学院, 太谷 030801;2. 山西农业大学实验教学中心, 太谷 030801;3. 山西农业大学生命科学学院, 太谷 030801

关键词：绵羊,c-Myc基因,EGFP,真核表达,生物信息学,细胞周期相关基因,调控元件

基金：国家自然科学基金（31872438）；国家留学基金（201708140150）；山西省回国留学人员科研资助项目（2016-067）；山西省留学回国人员科技活动择优资助项目；山西省平台基地和人才专项优秀人才科技创新项目（201605D211028）；山西省重点研发计划项目（201803D221022-4）；山西农业大学中青年拔尖创新人才支持计划（BJRC201204）；山西农业大学横向科技项目（2015HX12）

为了探讨c-Myc基因对细胞增殖及相关基因表达的调控作用，本试验构建了c-Myc-（G4S）3-EGFP融合基因的真核表达载体pc-Myc-EGFP，并利用生物信息学分析了其结构和理化特征。转染后分别通过细胞计数和qRT-PCR检测了其对绵羊胚胎成纤维细胞（sheep embryonic fibroblasts，SEF）增殖及相关基因表达的影响，并利用启动子分析软件解析了相应的表达调控机制。酶切鉴定和测序结果表明，载体构建成功。生物信息学分析表明，绵羊c-Myc蛋白主要定位于细胞核，含有螺旋环螺旋（helix-loop-helix，HLH）结构域，其分子量为48 474.78 u。融合蛋白c-Myc-（G4S）3-EGFP有较强的亲水性，且含有31个磷酸化位点。因（G4S）3有较高的灵活度（9.848 5），两侧的c-Myc和EGFP都保持各自的空间构象且互不干扰。进一步的细胞试验结果表明，重组质粒pc-Myc-EGFP在SEF中能够表达。过表达c-Myc促进了SEF的增殖，使cyclin D2、Cdk4、Cdk6、cyclin E1、cyclin A2、cdc25A mRNA的表达水平分别升高至5.20、3.10、6.54、6.52、23.37和8.22倍（P<0.01），E2F1 mRNA的表达升高至1.83倍（P<0.05）。启动子分析结果表明，各基因的5'调控区存在c-Myc和E2F1的结合元件。综上所述，绵羊c-Myc通过上调细胞周期相关基因的表达促进SEF细胞增殖，c-Myc的作用机制可能是通过直接作用于靶基因5'调控区的E-box元件，也可能是通过其他转录因子（如E2F1）的间接调控作用而实现。

来源：2020年第5期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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