畜牧兽医学报

作者：白晨雨, 王同燕, 赵少若, 王衡, 郝丽影, 李雪锋, 白露露, 邓跃, 王孟月, 邓均华, 李向东, 张桂红, 田克恭

单位：1. 洛阳普泰生物技术有限公司, 洛阳 471003;2. 国家兽用药品工程技术研究中心, 洛阳 471003;3. 国家非洲猪瘟区域实验室(广州), 广州 510642

关键词：非洲猪瘟病毒,p62蛋白,单克隆抗体,免疫组化

基金：洛阳市重大科技专项；万人计划青年拔尖人才；广东省非洲猪瘟科技应急防控专题（2019B020211003）

为制备非洲猪瘟病毒（ASFV）p62蛋白的特异性单克隆抗体，并初步应用于感染组织样品中ASFV抗原的免疫组化（IHC）检测，本研究以杆状病毒表达的非洲猪瘟病毒重组p62蛋白免疫BALB/c小鼠，取其脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合获得杂交瘤细胞。结果显示：基于纯化的p62蛋白建立的间接ELISA方法对杂交瘤细胞进行筛选和亚克隆，获得了18株可稳定分泌抗非洲猪瘟病毒p62蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株。经IFA检测，制备的单克隆抗体均与非洲猪瘟病毒反应，且不与猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病病毒、猪圆环病毒2型等猪源常见病毒反应，特异性良好。抗体识别蛋白的鉴定结果显示，3株MAbs识别p35蛋白，15株MAbs识别p15蛋白。14株MAbs重链亚类为IgG1型，4株MAbs重链亚类为IgG2a，轻链均为κ链。利用18株MAbs对ASFV感染猪的肺、扁桃体、淋巴结等组织进行IHC检测，结果显示5株MAbs均能够与感染ASFV的组织发生特异性的免疫反应。本研究获得的非洲猪瘟病毒p62蛋白单克隆抗体可为非洲猪瘟病毒免疫学检测方法的建立及p62蛋白的结构功能等基础研究提供重要的生物材料。

来源：2020年第5期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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