畜牧兽医学报

作者：王宁, 谨瑾, 刘璐, 刘欢欢, 姜立波, 辛九庆, 刘恒贵

单位：1. 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物支原体病创新团队, 哈尔滨 150069;2. 齐齐哈尔市动物卫生监督所, 齐齐哈尔 161000

关键词：猪肺炎支原体,单克隆抗体,P97蛋白,表位鉴定

基金：兽医生物技术国家重点实验室自主研究课题（SKLVBP201806）；中央级公益性科研院所基本科研业务费专业（1610302017014）

为了制备能够用于阻断ELISA检测的猪肺炎支原体（Mycoplasma hyopneumoniae，Mhp）单克隆抗体（MAb），本研究将原核表达的Mhp J株P97蛋白C末端包含R1区的肽段（P97CR1）作为免疫原免疫BALB/C雌鼠，筛选获得一株能稳定分泌抗Mhp P97蛋白MAb的杂交瘤细胞株A3。鉴定结果显示，A3 MAb是IgG1亚类，轻链为κ链。Western blot结果显示A3 MAb能够和原核表达纯化的P97CR1蛋白特异性反应，并且在流式细胞仪分析中能够识别天然的Mhp。通过逐渐截短表达分析该MAb识别的表位序列为LDDNLQ，该抗原表位在Mhp菌株中高度保守。阻断ELISA初步试验结果显示，A3 MAb与蛋白抗原的结合能够被Mhp高免阳性血清阻断。该MAb的制备为进一步建立特异性强、灵敏度高的Mhp阻断ELISA检测方法奠定了基础。

来源：2020年第5期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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