畜牧兽医学报

作者：杨远潇, 字向东

单位：西南民族大学生命科学与技术学院, 成都 610041

关键词：牦牛,卵母细胞,体外受精,玻璃化冷冻,转录组测序

基金：国家重点研发计划项目（2018YFD0502303）；中央高校基本科研业务费专项资金项目（2015NZYTD02）

旨在探讨玻璃化冷冻-解冻对牦牛未成熟卵母细胞发育能力及卵丘-卵母细胞复合体（COCs）转录组的影响，为完善牦牛COCs冷冻保存技术提供理论依据。本研究将未经成熟培养的牦牛COCs进行玻璃化冷冻-解冻后分为2组，A组：COCs体外成熟（IVM）后用普通牛精子进行体外受精（IVF），获得的受精卵在G-1胚胎培养液中培养72 h后转入G-2培养液培养96 h；B组：IVF后，受精卵在G-1培养液培养120 h后转入G-2培养液培养48 h；以未进行冷冻处理的新鲜COCs作为对照组（C组）：IVF后，受精卵在G-1培养液培养72 h后转入G-2培养液培养96 h。对牦牛新鲜COCs（n=3）和玻璃化冷冻-解冻的COCs（n=3）进行扩增、建库和转录组测序（RNA-seq）分析。结果发现，B组的卵裂率、囊胚率显著高于A组（P<0.05），但A组和B组的卵裂率、囊胚率均显著低于C组（P<0.05）。以|log2（fold change）|≥ 2，Q<0.05为阈值，牦牛冻融COCs相对于新鲜COCs共筛选出851个差异表达基因（DEGs），其中上调846个，下调5个。GO分析表明，DEGs主要富集于生物过程、细胞组分和分子功能3大类；KEGG注释结果表明，DEGs富集到258条通路，其中16条通路显著富集（P<0.05）。研究表明，IVF后在G-1培养液中培养120 h可以提高牦牛玻璃化冷冻卵母细胞的后续发育能力；玻璃化冷冻影响牦牛COCs转录组，从而降低卵母细胞的发育潜力。该发现为完善牦牛COCs玻璃化冷冻技术提供了一定的理论基础。

来源：2020年第2期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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