畜牧兽医学报

作者：陈绍基, 李芳, 尹莎莎, 江艾耘, 周荣琼

单位：西南大学动物科学学院, 荣昌 402460

关键词：犬弓首蛔虫,CPG1,原核表达,几丁质结合

基金：国家自然科学基金（31672541；31172313）

为探讨犬弓首蛔虫（Toxocara canis，T.canis）软骨素蛋白多糖TcCPG1的表达特征及其与几丁质的结合方式，为犬弓首蛔虫软骨素蛋白多糖的功能研究提供依据，笔者克隆T.canis软骨素蛋白多糖1基因（Tc-cpg-1）并原核表达重组蛋白TcCPG1，采用镍柱亲和层析技术对重组蛋白进行纯化，并与几丁质进行结合试验；采用实时荧光定量PCR（quantitative real-time polymerase chain reaction，qRT-PCR）进行Tc-cpg-1基因的转录水平的性别和组织差异表达分析。结果显示：Tc-cpg-1基因编码区（coding sequence，CDS）的长度为1 251 bp，共编码417个氨基酸；SDS-PAGE电泳结果显示重组蛋白TcCPG1以包涵体形式存在，相对分子质量大小约为70 ku；对表达条件进行优化后，以0.8 mmol·L-1 IPTG于16℃诱导14 h时可获得大量目的蛋白；利用镍柱亲和层析纯化可以获得具有较高纯度的目的蛋白，与几丁质进行结合试验，验证了重组蛋白TcCPG1能够与几丁质结合；通过qRT-PCR对Tc-cpg-1基因转录水平的组织差异性进行分析，发现Tc-cpg-1在雌虫中高量表达，尤其在雌虫的生殖组织中表达量最高，表明Tc-cpg-1可能参与了T.canis雌虫的生殖过程，推测TcCPG1可能通过与卵壳中几丁质的相互作用从而影响T.canis的胚胎和生殖发育过程。

来源：2020年第2期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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