畜牧兽医学报

作者：陈少杰, 刘立辉, 吴志勇, 肖娜, 袁广富, 王晶, 邢亚茹, 刘如月, 范京惠, 左玉柱

单位：1. 河北农业大学动物医学院, 保定 071001;2. 定州市农业农村局, 定州 073000;3. 邯郸市畜牧技术推广站, 邯郸 056000

关键词：猪星状病毒,荧光定量,SYBRGreenⅠ

基金：河北省重点研发计划项目（19226622D）；河北省农业产业技术体系生猪创新团队（HBCT2018110207）

为建立一种快速检测猪星状病毒4型（PAstV4）的SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR检测方法，根据已知的猪星状病毒4型序列的ORF1a基因设计了特异性引物，并将扩增片段克隆到pMD19-T载体上；将构建的重组质粒作为标准品建立SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR检测方法，并对建立方法的灵敏性、特异性及重复性进行验证。结果显示，建立的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法最低检测量为50.3拷贝·μL-1，其灵敏度是普通PCR的100倍；与CSFV、PRRSV、PRV、PEDV、PDCoV无交叉反应，特异性较好；建立的标准曲线呈良好的线性关系，相关系数R2=1.00。应用该方法检测了2018-2019年收集的43份临床样品，阳性率为18.6%。本研究为猪星状病毒4型的临床检测建立了一种快速、灵敏、特异性强的方法。

来源：2020年第2期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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