畜牧兽医学报

作者：侯璐, 王一, 张爽, 李国利, 曾磊, 郭玉堃, 翟云云, 于朋伟, 王棋, 王春凤, 杜永坤, 万博

单位：河南农业大学农业部动物生化与营养重点开放实验室, 郑州 450002

基金：转基因生物新品种培育重大专项（2016ZX08006001-006）；优势特色学科建设经费（203/18xk0102）；2019河南省重点研发与推广专项（192102110191）；“十二五”农村领域国家科技计划课题（2015BAD12B02-3）

研究干扰素基因刺激因子（STING）基因敲除对猪伪狂犬病病毒（PRV）复制的影响。用CRISPR/Cas9技术敲除猪肺巨噬细胞系（3D4/21）的STING基因，用T7核酸酶检测靶基因敲除效率，用细胞计数试剂盒检测基因敲除细胞的活力，用表达绿色荧光蛋白（GFP）的重组病毒PRV-GFP感染基因敲除细胞，用流式细胞术检测感染细胞的荧光强度，用定量RT-PCR检测PRV的gB、TK基因表达及其感染细胞的IL-1β、IFN-β、ISG15基因转录，用Western blot检测PRV gE蛋白表达水平，用病毒滴定法测定子代病毒滴度。结果显示：设计的3个STING基因外显子2特异sgRNA均能切割3D4/21细胞的靶序列，其中sgRNA3的基因编辑效率最高；对sgRNA1介导STING基因敲除系进行克隆化，获得基因敲除细胞系3株，基因敲除对细胞活力无影响；亲本细胞培养的PRV-GFP感染阳性细胞占80.77%，STING基因敲除细胞培养的PRV-GFP感染阳性细胞占95.55%；STING基因敲除对PRV基因表达具有促进作用，亲本3D4/21细胞的病毒滴度为106.2 TCID50·0.1 mL-1，STING基因敲除细胞的病毒滴度为108.3TCID50·0.1 mL-1，病毒感染细胞的IL-1β、IFN-β和ISG15转录下调明显。STING基因敲除能促进PRV在3D4/21细胞中复制，可能与感染细胞的IL-β、IFN-β和ISG15表达抑制有关。

来源：2019年第11期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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