畜牧兽医学报

作者：马维武, 周学章

单位：宁夏大学西部特色生物资源保护与利用教育部重点实验室, 银川 750021

基金：国家自然科学基金（31660728；31460676）

研究产PV-杀白细胞素（PVL）金黄色葡萄球菌ATCC49775、pvl缺陷株△pvl 49775和相应的回补株C-△pvl 49775以及体外重组的PVL（rPVL）对奶牛乳腺上皮细胞的损伤作用，为系统研究金黄色葡萄球菌感染奶牛乳腺上皮细胞的机制提供依据。采用原核表达的方法构建金黄色葡萄球菌LukS-PV和LukF-PV重组质粒并分别转化大肠杆菌BL21，诱导表达纯化后对其进行Western blot鉴定；用Live/Dead细胞荧光染色和Annexin V-FITC/PI双染法检测ATCC49775、△pvl 49775、C-△pvl 49775和rPVL对奶牛乳腺上皮细胞凋亡的影响。成功构建pET28a-LukS-PV、pET28a-LukF-PV重组表达载体，经诱导表达纯化后获得的LukS-PV浓度为0.6 mg·mL-1，LukF-PV浓度为1.15 mg·mL-1。rPVL主要诱导奶牛乳腺上皮细胞凋亡（P<0.01），金黄色葡萄球菌ATCC49775、△pvl 49775和C-△pvl 49775均能诱导奶牛乳腺上皮细胞明显凋亡和坏死，但pvl阳性菌株ATCC49775和C-△pvl 49775诱导的奶牛乳腺上皮细胞凋亡率和坏死率明显高于△pvl 49775（P<0.05）。结果表明原核表达的rPVL对奶牛乳腺上皮细胞表现出较强的毒性；pvl缺陷株△pvl 49775诱导奶牛乳腺上皮细胞凋亡和坏死的能力比pvl阳性菌株ATCC49775和C-△pvl 49775低，说明PVL在金黄色葡萄球菌感染奶牛乳腺上皮细胞过程中有重要作用。

来源：2019年第10期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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