畜牧兽医学报

作者：王晶宇, 欧阳伟, 钱晶, 王晓丽, 夏兴霞, 诸玉梅, 毕振威, 王永山

单位：江苏省农业科学院兽医研究所, 农业部兽用生物制品工程技术重点实验室, 南京 210014

基金：国家重点研发计划项目（2016YFD0501000）；公益性行业（农业）科研专项（201303042）；江苏省农业科技自主创新资金（CX（15）1065）

本研究旨在利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达具有生物活性的犬白蛋白-犬干扰素α2（albumin-CaIFN-α2）。将蜂素信号肽（HBM）、犬血清白蛋白（Alb）与犬干扰素α2的融合基因经密码子优化后，连接至转移载体pFastBac1中，获得了重组pFastBac1-HBM-Alb-CaIFN-α2，将重组质粒转化DH10Bac感受态细胞，经过三次蓝白斑筛选纯化，得到的重组穿梭质粒rBac-HBM-Alb-CaIFN-α2转染Sf9细胞，72 h后可观察到明显的细胞病变。用第三代重组杆状病毒rBac-HBM-Alb-CaIFN-α2感染Sf9昆虫细胞，感染3 d后，收获昆虫细胞和细胞培养物，间接免疫荧光（IFA）结果显示，重组杆状病毒感染的细胞呈现绿色荧光；Western blot检测结果显示，在约90 ku左右可观察到特异性条带，证实重组Alb-CaIFN-α2能够在昆虫细胞中表达。利用MDCK/VSV微量细胞病变抑制法检测重组Alb-CaIFN-α2的抗病毒活性，结果显示重组Alb-CaIFN-α2的活性为1.70×106 U·mL-1，为进一步研究新型犬用干扰素制品奠定了试验基础。

来源：2019年第10期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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