畜牧兽医学报

作者：宋慧子, 栾兆进, 王兆琛, 杜炜, 赵勇超, 张家新

单位：内蒙古农业大学动物科学学院, 内蒙古自治区动物遗传育种与繁殖重点实验室, 呼和浩特 010018

基金：内蒙古自治区自然科学基金（2018MS03012）

旨在建立绵羊附睾上皮永生化细胞系，为进一步研究绵羊附睾功能调节机制提供基础。本研究采用酶消化法分离培养原代绵羊附睾上皮细胞，利用脂质体将pCI-neo-hTERT质粒转入绵羊附睾上皮细胞（SEECs），经G418筛选得到了细胞系hTERT-SEECs，免疫荧光法鉴定其角蛋白18（CK18）和人端粒酶逆转录亚基（hTERT）表达情况；RT-PCR检测其hTERT mRNA的表达；采用CCK-8法绘制细胞生长曲线检测其增殖能力；利用流式细胞仪检测其周期和细胞凋亡情况；核型分析检测其倍体情况；从mRNA和蛋白水平检测其谷胱甘肽过氧化物酶5（GPX5）和雄激素受体（AR）的表达情况。结果显示，原代绵羊附睾上皮细胞呈典型的铺路石状形态。hTERT成功转入绵羊附睾上皮细胞，传45代后，hTERT-SEECs仍呈铺路石状；hTERT-SEECs仍可稳定表达CK18和hTERT，并且拥有正常的二倍体核型；hTERT-SEECs增殖能力高于原代细胞，hTERT-SEECs处于G1期的细胞比例显著低于SEECs（P<0.05），处于S期细胞比例显著高于SEECs（P<0.05），且其活细胞率显著高于SEECs（P<0.05），凋亡率显著低于SEECs（P<0.05）；hTERT-SEECs和SEECs的GPX5和AR蛋白表达量差异不显著（P>0.05）。本研究所建立的hTERT-SEECs经长期培养后仍具有正常的附睾上皮细胞形态，增殖能力强并保留了附睾上皮细胞的生物学特性。

来源：2019年第9期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

查看畜牧兽医学报杂志2019年第9期