畜牧兽医学报

作者：郑嘉铭, 贺双江, 赵鸿雁, 宋瑞龙, 刘宗平

单位：1. 扬州大学兽医学院, 扬州 225009;2. 江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心, 扬州 225009

基金：国家重点研发计划支持项目（2016YFD0501208）；国家自然科学基金（31672620；31702304；31872533）；江苏省自然科学基金青年基金项目（BK20150447）；江苏高校优势学科建设工程资助项目

为了研究RhoU（Wrch1）在破骨细胞（osteoclast，OC）分化过程中的作用及其机理，试验以RAW 264.7细胞（单核巨噬细胞系）为基础材料，分别转染阴性慢病毒和siRhoU慢病毒并建立稳定的细胞系；在巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）和核因子κB受体活化因子配体（RANKL）存在的条件下，阴性对照组和RhoU沉默组细胞系分别诱导3或4 d。采用荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）技术检测RhoU和破骨细胞标志性mRNA的表达，蛋白免疫印迹（Western blot）技术检测RhoU和破骨细胞标志性蛋白的表达，抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色观察OC的形成，激光共聚焦显微镜观察OC及其前体细胞的形态变化。结果显示，与阴性对照组相比，RhoU沉默组RhoU基因mRNA和蛋白表达量极显著降低（P<0.01）；OC形成的数量和面积极显著减少（P<0.01）；OC前体细胞丝状伪足形成受阻，破骨细胞缺乏完整的封闭带；OC特异性基因mRNA和蛋白表达量均显著或极显著下降（P<0.01或P<0.05），而TRAP基因mRNA变化不显著（P>0.05）。综上表明，沉默RhoU基因能抑制破骨细胞的分化，抑制前体细胞丝状伪足的形成进而影响其融合可能是其主要原因。

来源：2019年第9期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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