畜牧兽医学报

作者：胡永新, 赵永刚, 张永强, 刘拂晓, 樊晓旭, 吴晓东, 王志亮

单位：中国动物卫生与流行病学中心, 青岛 266032

基金：“十三五”国家重点研发计划（2017YFD0501800）；青岛市博士后应用研究项目

本研究旨在构建能够表达非洲猪瘟病毒（ASFV） P72蛋白的缺陷型重组腺病毒。参考ASFV China-SY18株的基因序列，合成B646L基因。先将合成的B646L基因通过TOPO连接克隆到过渡载体pENTR/D-TOPO中；再将插入B646L基因的过渡载体pENTR/D-TOPO-ASFV-P72与pAd/CMV/V5-DEST腺病毒骨架载体进行重组，得到pAd-ASFV-P72重组质粒；重组质粒经PacⅠ酶切线性化后转染293A细胞，连续传代后获得重组腺病毒。结果表明，获得的Ad5-ASFV-P72重组腺病毒的滴度为2.53×109 IFU·mL-1；经免疫荧光方法及Western blot鉴定ASFV-P72蛋白在Vero细胞中成功表达，且能够与ASFV标准阳性血清发生特异性反应。本研究成功获得能够表达ASFV P72蛋白的重组腺病毒Ad5-ASFV-P72，不仅为ASFV多基因重组腺病毒载体疫苗的研制奠定了一定基础，还为ASFV相关血清学诊断方法的建立提供了安全有效的抗原。

来源：2019年第8期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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