畜牧兽医学报

作者：翟亚军, 梁军, 魏单单, 孙华润, 潘玉善, 吴华, 刘建华, 胡功政

单位：1. 河南农业大学牧医工程学院, 郑州 450002;2. 郑州市畜牧局, 郑州 450052

基金：国家自然科学基金（31772799；31372481）

为了探索cpxR对鼠伤寒沙门菌的黏菌素耐药相关基因pmrB和phoQ的调控作用，用overlapping PCR扩增得到cpxR、pmrB和cpxR、phoQ共表达基因cpxR-pmrB、cpxR-phoQ，用2倍微量肉汤稀释法对构建的pmrB、phoQ单基因过表达菌株JSΔacrBΔcpxR：：kan/ppmrB（JSΔΔ/pB）、JSΔacrBΔcpxR：：kan/pphoQ（JSΔΔ/pQ）和cpxR-pmrB、cpxR-phoQ共表达菌株JSΔacrBΔcpxR：：kan/pcpxR-pmrB（JSΔΔ/pRB）、JSΔacrBΔcpxR：：kan/pcpxR-phoQ（JSΔΔ/pRQ）进行黏菌素最小抑菌浓度（MICs）的测定，同时以各菌株在LB中的OD600nm值绘制生长曲线，以各菌株在不同浓度的黏菌素中的存活率绘制杀菌曲线。结果：成功构建的鼠伤寒沙门菌pmrB、phoQ的单基因过表达菌株JSΔΔ/pB、JSΔΔ/pQ和cpxR-pmrB、cpxR-phoQ共表达菌株JSΔΔ/pRB、JSΔΔ/pRQ的MIC结果显示，JSΔacrBΔcpxR：：kan/pcpxR（JSΔΔ/pR）的MIC值较JS下降93.75%，与本实验室前期研究结果一致。JSΔΔ/pB、JSΔΔ/pQ的MIC值较JS均上升3倍，而JSΔΔ/pRB、JSΔΔ/pRQ的MIC值较JS分别降低50%和75%。生长曲线结果显示JSΔΔ/pR的生长活性最低，JSΔΔ/pB、JSΔΔ/pQ、JSΔΔ/pRB和JSΔΔ/pRQ的生长活性均低于JSΔacrBΔcpxR：：kan/pHisA（JSΔΔ/pHisA）。黏菌素的杀菌曲线结果显示JSΔΔ/pB和JSΔΔ/pQ在不同浓度的黏菌素中的存活率显著高于黏菌素较敏感的JSΔΔ/pRB和JSΔΔ/pRQ。上述结果表明：CpxR能够通过PmrB和PhoQ调控鼠伤寒沙门菌对黏菌素的敏感性。

来源：2019年第6期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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