畜牧兽医学报

作者：武乐祎, 吴素芳, 车影, 张强, 李鹏, 卞广林, 王选年

单位：1. 新乡学院生命科学与技术学院生物技术研究中心, 新乡 453003;2. 郑州大学, 郑州 450000;3. 浙江海隆生物技术有限公司, 绍兴 312000

基金：国家重点研发计划（2016YFD0500702）；河南省科技攻关项目（122102110142）；河南省高等学校重点科研项目（19A230009）

建立高表达PCV2-Cap蛋白的CHO-K1悬浮稳转细胞系，鉴定蛋白的免疫原性，为开发新型且有效防治猪圆环病毒的亚单位疫苗奠定基础。构建重组质粒pEE12.4-PCV2-Cap，转染CHO-K1细胞，通过加压筛选，有限稀释，细胞悬浮驯化及Western blot检测得到高表达Cap蛋白的悬浮稳转单克隆细胞株，并对该细胞株进行发酵，纯化得到的目的蛋白，通过小鼠免疫验证其免疫原性。结果表明PCV2-Cap蛋白能够在CHO-K1细胞中正确表达；发酵过程中活细胞密度高达6×106个·mL-1，细胞活力在80%以上，PCV2-Cap蛋白表达量约为370 mg·L-1；利用间接ELISA检测小鼠免疫后血清中的抗体水平，证明了利用CHO-K1细胞生产的Cap蛋白具备良好的免疫原性。本研究成功构建了表达PCV2-Cap蛋白的CHO-K1悬浮稳转细胞系，并进一步对目的蛋白进行免疫原性分析，为猪圆环病毒亚单位疫苗的开发打下扎实的基础。

来源：2019年第5期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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