畜牧兽医学报

作者：邢智洋, 张梦璐, 张菡, 王月影, 韩立强, 高腾云, 杨国宇

单位：河南农业大学牧医工程学院 农业部动物生化与营养重点实验室, 郑州 450002

基金：现代农业产业技术体系专项资金（CARS-37）；国家重点研发计划（2016YFD0500503）；中国博士后基金（2016M592291）；河南省自然科学基金（162300410152）；河南省兽医学优势特色学科建设经费（203/18xk0102）

旨在探究沉默固醇调节元件结合蛋白裂解激活蛋白（SREBP cleavage-activating protein，SCAP）对奶牛乳腺上皮细胞脂滴的影响，本研究构建了SCAP短发夹RNA慢病毒载体，包装感染奶牛乳腺上皮细胞，通过在培养基中添加嘌呤霉素筛选获得SCAP基因沉默稳转细胞株，采用Real-time PCR和Western blot观察基因沉默细胞株中SCAP基因和蛋白的表达，尼罗河红和油红O染色脂滴检测SCAP基因沉默及SCAP质粒瞬时转染对细胞脂滴形成的影响。结果表明，本研究成功构建了奶牛SCAP基因沉默慢病毒重组载体，感染细胞后经过5 mg·L-1嘌呤霉素筛选得到SCAP基因沉默稳转细胞株。基因检测发现，各个沉默细胞株的SCAP基因表达显著降低（P<0.05或P<0.01）。与对照组相比，RNAi-SCAP3细胞中的SCAP蛋白表达降低为对照组的0.49倍（P<0.05），脂代谢基因SCD和FAS表达也显著下降（P<0.05）。脂滴染色发现，RNAi-SCAP3沉默细胞株的脂滴含量显著低于对照组细胞（P<0.01），脂滴直径≤ 2.0 μm的小脂滴个数增多，而直径≥ 2.5 μm的大脂滴个数减少；将SCAP真核表达载体瞬时转染RNAi-SCAP3细胞株后发现，SCAP基因的过表达显著减少了细胞中小脂滴比例而增加了大脂滴比例（P<0.05）。本研究成功构建了SCAP基因沉默稳转细胞株，发现SCAP的表达影响了细胞脂滴直径的大小。

来源：2019年第3期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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