畜牧兽医学报

作者：顾丽红, 徐铁山, 林哲敏, 赵建国, 林鹏, 杨少雄, 林大捷, 侯水生

单位：1. 海南省农业科学院畜牧兽医研究所, 海口 571100;2. 中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所, 儋州 571737;3. 海南大学热带农林学院, 海口 570228;4. 海南传味番鸭养殖有限公司, 文昌 571326;5. 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所, 北京 100193

基金：现代农业产业技术体系建设专项资金（CARS-42-50）；海南省自然科学基金（317185）；海南省重点研发计划（ZDYF2018224）

旨在通过研究鸭miR-21的分子特征、时空表达模式以及对鸭骨骼肌卫星细胞的增殖与分化的影响，为探索骨骼肌发育机制提供支撑。本研究选取180枚（98±5）g鸭蛋，相同条件孵化。从孵化第11天到第27天每天取3枚鸭蛋（分别表示为：E11、E12、E13……E26、E27），无菌状态下逐只采集鸭胚胸肌样品。E27时另取3只鸭胚逐只采集腿肌、心、肝、肾、肌胃、小肠、腹脂和皮脂。混合酶消化法和差速贴壁法分离和纯化骨骼肌卫星细胞，骨骼肌卫星细胞增殖、分化时期分别过表达和干扰miR-21表达，利用荧光定量、蛋白杂交、EdU检测及流式细胞术等检测miR-21对鸭骨骼肌卫星细胞增殖和分化的影响。qRT-PCR结果显示，miR-21的表达随着孵化时间的增加而增加，E19天时到达最高，然后逐渐降低；E27时，miR-21在肝中的表达量最高。在增殖的鸭骨骼肌卫星细胞中过表达miR-21，荧光定量PCR检测CDK2和CyclinD1基因的mRNA表达量分别显著（P<0.05）和极显著增加（P<0.01），EdU检测阳性细胞数目显著增加（P<0.05），流式细胞仪检测发现G2期细胞数目极显著降低（P<0.01）、S期细胞数量显著增加（P<0.05）。在增殖的骨骼肌卫星细胞中，干扰miR-21表达，所得结果相反。在分化的鸭骨骼肌卫星细胞中过表达miR-21，qRT-PCR检测MyoG和MyHC基因的mRNA表达量均极显著增加（P<0.01）；蛋白杂交（WB）检测结果显示，MyoG蛋白表达显著增加（P<0.05），MyHC蛋白表达极显著增加（P<0.01）。免疫荧光检测发现，MyHC阳性细胞数和10核以上的肌管数都极显著增加（P<0.01）。在分化的鸭骨骼肌卫星细胞中，干扰miR-21的表达，所得结果相反。结果表明，miR-21具有促进成肌细胞鸭骨骼肌卫星细胞增殖和分化的作用。

来源：2019年第2期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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