畜牧兽医学报

作者：王俊伟, 陈芳洲, 库旭钢, 李畅, 何启盖

单位：1. 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室, 武汉 430070;2. 华中农业大学动物医学院, 武汉 430070;3. 湖北省预防兽医学重点实验室, 武汉 430070;4. 生猪健康养殖协同创新中心, 武汉 430070

基金：国家生猪产业技术体系（CARS-35）

为了建立一种敏感和特异的猪圆环病毒3型（PCV3）抗体检测方法，对PCV3-Cap蛋白抗原表位预测发现其抗原表位多聚集在C端（羧基端），而N端前33氨基酸为核定位序列。以截断N端前120个氨基酸后的PCV3 ORF2序列为靶基因，设计引物。以PCV3阳性病料为模板，PCR扩增截短的ORF2基因，并将其克隆至pET-30a载体构建重组质粒，并转染至大肠杆菌E.coli BL21感受态细胞，获得重组菌后选择最佳诱导表达条件，采用Ni-NTA亲和层析柱纯化表达产物。以纯化后的重组Cap蛋白作为包被抗原，建立PCV3间接ELISA（indirect ELISA）诊断方法，并初步用于临床样品检测。结果：从阳性病料中扩增出大小为285 bp的PCV3 ORF2基因片段，重组质粒经双酶切和测序鉴定构建成功。采用1 mmol·L-1 IPTG诱导，在37℃条件下培养6 h重组菌，重组蛋白获最佳表达。Western blot结果表明，该重组蛋白与PCV3阳性血清具有较好的反应原性。ELISA的最佳包被抗原质量浓度为1 μg·mL-1，待检血清最佳稀释度为1：20，酶标抗体最佳工作浓度为1：5 000。阳性判定值为S/P ≥ 0.273。批内和批间系数均小于10%，表明该方法具有较好的重复性。PCV2阳性血清用本方法检测为阴性，表明该方法有较好的特异性。检测采集的439份临床猪血清，PCV3抗体阳性检出率为60.59%（266/439）。结果表明，本研究建立了一种快速、简便、敏感、特异的猪圆环病毒3型（PCV3）抗体检测方法。

来源：2019年第2期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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