畜牧兽医学报

作者：王金明, 高宇凤, 成小芳, 杨镓蓉, 徐慧淼, 赵阳飞, 李妍妍

单位：1. 山西农业大学动物科技学院, 太谷 030801;2. 山西农业大学文理学院, 太谷 030801

基金：国家自然科学基金青年项目（31001089）；山西省自然科学基金面上项目（2014011027-3）；山西省优秀博士来晋工作奖励资金（SXYBKY201731）

为探讨氟致成骨细胞自噬和凋亡中GSTO1的作用机制，利用RNA干扰（RNAi）技术，抑制GSTO1基因在小鼠成骨细胞中表达，检测染氟小鼠成骨细胞中自噬和凋亡相关基因表达。针对小鼠成骨细胞GSTO1 mRNA序列设计、合成3对21核苷酸序列siRNA（siRNA1、siRNA2、siRNA3）；从3对序列中筛选最佳有效片段，然后检测不同质量浓度氟化钠（104、103、102、10、1 mg·L-1）下GSTO1的mRNA转录，确定最佳氟浓度。试验分为空白对照组（control）、阴性对照组（NC-siRNA）、氟化钠组（1 mg·L-1）、沉默目的基因组（siRNA-GSTO1）和氟化钠加沉默目的基因组（NaF/siRNA-GSTO1），用RT-PCR技术检测成骨细胞自噬相关基因LC3、p62、Beclin1、Atg3、Atg5和凋亡相关基因BCL2、Caspase-3的转录，同时应用Western blot技术检测LC3、p62、Beclin1、Atg3和Atg5蛋白表达。结果显示：用HE、吉姆萨、碱性磷酸酶、茜素红四种染色法鉴定试验所用细胞为成骨细胞。确定试验模型中50 nmol·L-1为siRNA的最佳转染浓度，siRNA2为最佳沉默转染片段，NaF的最佳浓度为1 mg·L-1。成骨细胞染氟与GSTO1基因抑制均可使LC3、Beclin1、Atg5和BCL2基因转录显著升高，p62和Caspase-3基因转录显著下降；但与NaF组相比较，NaF/siRNA-GSTO1组LC3、Beclin1、和Atg5基因mRNA转录水平显著降低（P<0.05），而p62和Caspase-3基因转录显著升高（P<0.05）。Western blot检测成骨细胞自噬相关蛋白LC3、Beclin1、Atg5和p62的表达与基因转录趋势完全一致。结果表明，低剂量氟与沉默GSTO1表达均可致成骨细胞自噬增强的同时凋亡减弱，GSTO1对低剂量氟致成骨细胞自噬增强与抑制凋亡有一定的协同效应。

来源：2019年第1期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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